1．了解不同微生物培養(yǎng)在斜面上和液體、半固體培養(yǎng)基中的特征。

2．進(jìn)一步熟練和掌握微生物的無菌操作接種技術(shù)。

二、基本原理

微生物的培養(yǎng)特征是指微生物培養(yǎng)在培養(yǎng)基上所表現(xiàn)出的群體形態(tài)和生長情況。一般可用斜面、液體和半固體培養(yǎng)基來檢驗(yàn)不同微生物的培養(yǎng)特征。它們培養(yǎng)在斜面培養(yǎng)基上，可以呈絲線狀、刺毛狀、串珠狀、疏展?fàn)�、樹枝狀或假根狀。生長在液體培養(yǎng)基內(nèi)，可以呈混濁、絮狀、粘液狀、形成菌膜、上層清晰而底部顯沉淀狀。穿刺培養(yǎng)在半固體培養(yǎng)基中，可以沿接種線向四周蔓延；或僅沿線生長；也可上層生長得好，甚至連成一片，底部很少生長；或底部長得好，上層甚至不生長。利用微生物的培養(yǎng)特征，可以作為它們的種類鑒定和識(shí)別純培養(yǎng)是否污染的參考。

檢驗(yàn)微生物的培養(yǎng)特征，或進(jìn)行其他微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)時(shí)，接種過程必須保證不被其他微生物所污染，為此，除工作環(huán)境要求盡可能地避免或減少雜菌污染外，熟練地掌握各種無菌操作接種技術(shù)是很重要的。

三、器材

枯草芽孢桿菌，大腸桿菌(Escherichia coli)，金黃色葡萄球菌，白地霉（Geo-trichum candidum），蕈狀芽孢桿菌（Bacillusmycoides），粘質(zhì)沙雷氏菌（粘質(zhì)賽氏桿菌， Serratia marcescens）；

肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基，肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，半固體肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，接種環(huán)，接種針，無菌吸管，酒精燈等。

四、操作步驟

1．斜面接種

（1）在肉膏蛋白胨斜面試管上，用記號(hào)筆寫上將接種的菌名、日期和接種者。

（2）點(diǎn)燃酒精燈或煤氣燈。

（3）將菌種試管和待接種的斜面試管，用大拇指和食指、中指、無名指握在左手中，并將中指夾在兩試管之間，使斜面向上，成水平狀態(tài)。在火焰邊用右手松動(dòng)試管塞，以利于接種時(shí)拔出。

（4）右手拿接種環(huán)通過火焰燒灼滅菌，在火焰邊用右手的手掌邊緣和小指，小指和無名指分別夾持棉塞（或試管帽），將其取出，并迅速燒灼管口。

（5）將滅菌的接種環(huán)伸入菌種試管內(nèi)，先將環(huán)接觸試管內(nèi)壁或未長菌的培養(yǎng)基，達(dá)到冷卻的目的，然后再挑取少許菌苔。將接種環(huán)退出菌種試管，迅速伸入待接種的斜面試管，用環(huán)在斜面上自試管底部向上端輕輕地劃直線，勿將培養(yǎng)基劃破，也不要使環(huán)接觸管壁或管口。

（6）接種環(huán)退出斜面試管，再用火焰燒管口，并在火焰邊將試管塞塞上。將接種環(huán)逐漸接近火焰，再燒灼。如果接種環(huán)上沾的菌體較多時(shí)，應(yīng)先將環(huán)在火焰邊烤干，然后燒灼，以免未燒死的菌種飛濺出污染環(huán)境，接種病原菌時(shí)更要注意此點(diǎn)。

2．液體培養(yǎng)基接種

向肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中接種少量菌體時(shí)，其操作步驟基本與斜面接種時(shí)相同，不同之處是挑取菌體的接種環(huán)放入液體培養(yǎng)基后，應(yīng)在液體表面處的管內(nèi)壁上輕輕磨擦，使菌體從環(huán)上脫落，混進(jìn)液體培養(yǎng)基，塞好試管塞后，搖動(dòng)液體，使菌體在液體中分布均勻，或用試管振蕩器混勻。

向液體培養(yǎng)基中接種量大或要求定量接種時(shí)，可將無菌水或液體培養(yǎng)基注入菌種試管，用接種環(huán)將菌苔刮下，再將菌種懸液以無菌吸管定量吸出加入，或直接倒入液體培養(yǎng)基。如果菌種為液體培養(yǎng)物，則可用無菌吸管定量吸出加入或直接倒入液體培養(yǎng)基。整個(gè)接種過程都要求無菌操作。

3．穿刺接種

用接種針挑取菌種（針必須挺直），自培養(yǎng)基的中心垂直地刺入半固體培養(yǎng)基中，直至接近管底，但不要穿透，然后沿原穿刺線將針拔出，塞上試管塞，燒灼接種針。

上述幾種接種法的無菌操作，凡未敘述的均按實(shí)驗(yàn)一操作。試驗(yàn)者應(yīng)反復(fù)練習(xí)無菌操作接種技術(shù)，直至較熟練地掌握。

4．將已接種的斜面、液體和半固體培養(yǎng)基放置28—30℃溫箱，培養(yǎng)2—3天后取出觀察結(jié)果。