（1）在外層鍋內(nèi)加適量的水，將需要滅菌的物品放入內(nèi)層鍋，蓋好鍋蓋并對稱地扭緊螺旋。

（2）加熱使鍋內(nèi)產(chǎn)生蒸氣，當(dāng)壓力表指針達(dá)到 33.78kPa時(shí)，打開排氣閥，將冷空氣排出，此時(shí)壓力表指針下降，當(dāng)指針下降至零時(shí)，即將排氣閥關(guān)好。

（3）繼續(xù)加熱，鍋內(nèi)蒸氣增加，壓力表指針又上升，當(dāng)鍋內(nèi)壓力增加到所需壓力時(shí)，將火力減小，按所滅菌物品的特點(diǎn)，使蒸氣壓力維持所需壓力一定時(shí)間，然后將滅菌器斷電或斷火，讓其自然冷后再慢慢打開排氣閥以排除余氣，然后才能開蓋取物。

（1）待滅菌的物品放置不宜過緊。
（2）必須將冷空氣充分排除，否則鍋內(nèi)溫度達(dá)不到規(guī)定溫度，影響滅菌效果。
（3）滅菌完畢后，不可放氣減壓，否則瓶內(nèi)液體會(huì)劇烈沸騰，沖掉瓶塞而外溢甚至導(dǎo)致容器爆裂。須待滅菌器內(nèi)壓力降至與大氣壓相等后才可開蓋。
（4）裝培養(yǎng)基的試管或瓶子的棉塞上，應(yīng)包油紙或牛皮紙，以防冷凝水入內(nèi)。
（5）為了確保滅菌效果，應(yīng)定期檢查滅菌效果，常用的方法是將硫磺粉末（熔點(diǎn)為115℃）或安息香酸（熔點(diǎn)為120℃）置于試管內(nèi)，然后進(jìn)行滅菌試驗(yàn)。如上述物質(zhì)熔化，則說明高壓蒸氣滅菌器內(nèi)的溫度已達(dá)要求，滅菌的效果是可靠的。也可將檢測滅菌器效果的膠紙（其上有溫度敏感指示劑）貼于待滅菌的物品外包裝上，如膠紙上指示劑變色，亦說明滅菌效果是可靠的。
（6）現(xiàn)在已有微電腦自控型高壓蒸氣滅菌器，只需放去冷氣后，儀器即可自動(dòng)恒壓定時(shí)，時(shí)間一到則自動(dòng)切斷電源并鳴笛，使用起來很方便。

最常用的滅菌方法，一般以 101.33kPa處理15～20min，可達(dá)到對物品進(jìn)行滅菌的目的。凡耐高溫和潮濕的物品，如常用培養(yǎng)基、生理鹽水、衣服、紗布、玻璃器材等都可用本法滅菌。