一、糖發(fā)酵管

成分：

牛肉膏 5g

蛋白胨 10g

氯化鈉 3g

磷酸氫二鈉  2g

0.2％滇麝香草酚藍(lán)溶液 12mL

蒸餾水 1000mL

PH 7.4

制法

1. 葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后,按0.5％加入葡萄糖,分裝于有一個(gè)倒置小管的小試管內(nèi)，121℃高壓滅菌15min。

2. 其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后，分裝每瓶1000 mL，121℃高壓滅菌15min。另將各種糖類(lèi)分別配好10%溶液，同時(shí)高壓滅菌。將5mL糖溶液加入于100 mL培養(yǎng)基內(nèi)，以無(wú)菌操作分裝小試管。

注：蔗糖不純，加熱后會(huì)自行水解者，應(yīng)采用過(guò)濾法除菌。

試驗(yàn)方法：從瓊脂斜面上挑取小量培養(yǎng)物接種，于36℃±1℃培養(yǎng)，一般觀察2～3d。遲緩反應(yīng)需觀察14~30d。

 

二、乳糖膽鹽發(fā)酵管

成分：

蛋白胨 20g

豬膽鹽（或牛、羊膽鹽）5g

乳糖 10g

0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL

蒸餾水 1000mL

制法：將蛋白胨，膽鹽及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示劑，分裝每管10 mL，并放入一個(gè)小倒管，115℃高壓滅菌15min。

注：雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其他成分加倍。

 

三、5％乳糖發(fā)酵管

成分：

蛋白胨 0.2g

氯化鈉 0.5g

乳糖 5g

2%溴麝香草酚藍(lán)水溶液 1.2mL

蒸餾水 100mL

pH 7.4

制法：除乳糖以外的各成分：溶解于50mL蒸餾水內(nèi)，校正pH。將乳糖溶解于另外50mL蒸餾水內(nèi)，分別滅菌121 ℃ 15min，將兩液混合，以無(wú)菌操作分裝于滅菌小試管內(nèi)。

注：在此培養(yǎng)基內(nèi)，大部分乳糖遲緩發(fā)酵的細(xì)菌可于ld內(nèi)發(fā)酵。

 

四、緩沖葡萄糖蛋白胨水（MR和VP試驗(yàn)用）

成分：

磷酸氫二鉀 5g

多胨 7g

葡萄糖 5g

蒸餾水 1000mL

制法：溶化后校正pH，分裝試管，每管1mL ，121℃高壓滅菌15min。

甲基紅（MR）試驗(yàn)：自瓊脂斜面挑取少量培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中，于36±1℃培養(yǎng)2～5d，哈夫尼亞菌則應(yīng)在22～25℃培養(yǎng)。滴加甲基紅試劑一滴，立即觀察結(jié)果。鮮紅色為陽(yáng)性，黃色為陰性，甲基紅試劑配法：10mg甲基紅溶于30mL95％乙醇中，然后加入20 mL蒸餾水。

V-P試驗(yàn)：用瓊脂培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中，于36±1℃培養(yǎng)2～4d。哈夫尼亞菌則應(yīng)在22～25℃培養(yǎng)。加入6％α-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40％氫氧化鉀溶液0.2mL充分振搖試管，觀察結(jié)果陽(yáng)性反應(yīng)立刻或于數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色，如為陰性，應(yīng)放在36±1℃下培養(yǎng)4h再進(jìn)行觀察。

 

五、營(yíng)養(yǎng)明膠

成分：

蛋白胨 5g

牛肉膏 3g

明膠 120g

蒸餾水 1000mL

pH 6.8~7.0

制法：加熱溶解，校正至pH7.4～7.6，分裝小管，121℃高壓滅菌10min，取出后迅速冷卻，使其凝固，復(fù)查最終pH應(yīng)為6.8～7.0。

試驗(yàn)方法：用瓊脂培養(yǎng)物穿刺接種，放在22～25℃培養(yǎng)，每天觀察結(jié)果，記錄液化時(shí)間。或放在36士1℃培養(yǎng)，每天取出，放冰箱內(nèi)30min后再觀察結(jié)果。

 

六、苯丙氨酸培養(yǎng)基

成分：

酵母浸膏 3g

DI-苯丙氨酸（或L-苯丙氨酸1g）2g

磷酸氫二鈉 1g

氯化鈉 5g

瓊脂 12g

蒸餾水 1000mL

制法：加熱溶解后分裝試管，121℃高壓滅菌15min，使成斜面。

試驗(yàn)方法：自瓊脂斜面上挑取大量培養(yǎng)物，移種于苯丙氨酸瓊脂，在36士1℃培養(yǎng)4h或18～24h，滴加10％三氯化鐵溶液2～3滴，自斜面培養(yǎng)物上流下，苯丙氨酸脫氨酶陽(yáng)性者呈深綠色。

 

七、蛋白胨水（靛基質(zhì)試驗(yàn)用）

成分：

蛋白胨（或胰蛋白胨）20g

氯化鈉 5g

蒸餾水 1000mL

pH7.4

制法：按上述成分配制，分裝小試管，121℃高壓滅菌15min。

靛基質(zhì)試劑

柯凡克試劑：將5g對(duì)二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中，然后緩慢加入濃鹽酸25ml。

歐-波試劑：將1g對(duì)二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇內(nèi)，然后緩慢加入濃鹽酸20 ml。試驗(yàn)方法：挑取小量培養(yǎng)物接種，在36士1℃培養(yǎng)1～2d，必要時(shí)可培養(yǎng)4～5d。加入柯凡克試劑約0.5mL，輕搖試管，陽(yáng)性者于試劑層呈深紅色；或加入歐-波試劑約0.5 mL，沿管壁流下，覆蓋于培養(yǎng)液表面，陽(yáng)性者于液面接觸處呈玫瑰紅色。

注：蛋白胨中應(yīng)含有豐富的色氨酸。每批蛋白胨買(mǎi)來(lái)后，應(yīng)先用已知菌種鑒定后方可使用。

 

八、硫酸亞鐵瓊脂（硫化氫試驗(yàn)用）

成分：

牛肉膏 3g

酵母浸膏 3g

蛋白胨 10g

硫酸亞鐵 0.2g

硫代硫酸鈉 0.3g

氯化鈉 5g

瓊脂 12g

蒸餾水 1000 mL

制法：加熱溶解，校正pH，分裝試管，115℃高壓滅菌15min，取出直立候其凝固。

試驗(yàn)方法：挑取瓊脂培養(yǎng)物，沿管壁穿刺，于36士1℃培養(yǎng)1～2d，觀察結(jié)果。產(chǎn)硫化氫者使培養(yǎng)基變?yōu)楹谏��?/span>

注：腸桿菌科細(xì)菌測(cè)定硫化氫的產(chǎn)生，應(yīng)采用三糖鐵瓊脂或本培養(yǎng)基。

 

九、尿素瓊脂

成分：

蛋白胨 1g

氯化鈉5g葡萄糖1g

磷酸二氫鉀 2g

4%酚紅溶液 3 mL

瓊脂 20g

蒸餾水 1000 mL

20%尿素溶液 100mL

制法：將除尿素和瓊脂以外的成分配好，并校正pH，加入瓊脂，加熱溶化并分裝燒瓶。121℃高壓滅菌15min。冷至50～55℃，加入經(jīng)除菌過(guò)濾的尿素溶液，尿素的最終濃度為2％，最終pH應(yīng)為7.2±0.1.分裝于滅菌試管內(nèi)，放成斜面?zhèn)溆谩?/span>

試驗(yàn)方法：挑取瓊脂培養(yǎng)物接種，在36士1℃培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。尿素酶陽(yáng)性者由于產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。

 

十、氰化鉀（KCN）培養(yǎng)基

成分：

蛋白胨10g

氯化鈉 5g

磷酸二氫鉀 0.225g

磷酸氫二鈉 5.64g

蒸餾水 1000 mL

0.5%氰化鉀溶液 20 mL

pH 7.6

制法：將除氰化鉀以外的成分配好后分裝燒瓶，121℃高壓滅菌15min。放在冰箱內(nèi)使其充分冷卻。每100 mL培養(yǎng)基加入0.5％氰化鉀溶液2.0mL（最后濃度為1：10000），分裝于12mm*100mm滅菌試管，每管約4mL，立刻用滅菌橡皮塞塞緊，放在4℃冰箱內(nèi)，至少可保存兩個(gè)月。同時(shí)，將不加氰化鉀的培養(yǎng)基作為對(duì)照培養(yǎng)基，分裝試管備用。

 

十一、營(yíng)養(yǎng)瓊脂

成分：

蛋白胨10g

牛肉膏3g

氯化鈉5g

瓊脂15～20g

蒸餾水1000mL

制法：將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內(nèi)，加入15%氫氧化鈉溶液約2mL，校正pH至7.2~7.4。加入瓊脂，加熱煮沸，使瓊脂溶化分裝燒瓶，121℃高壓滅菌15min。

注：此培養(yǎng)基可供一般細(xì)菌培養(yǎng)之用，可傾注平板或制成斜面。如用于菌落計(jì)數(shù)，瓊脂量為1.5%；如作成平板或斜面，則應(yīng)為2%。

 

十二、營(yíng)養(yǎng)肉湯

成分：

蛋白胨 10g

牛肉膏 3g

氯化鈉 5g

蒸餾水 1000mL

pH7.4

制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，分裝燒瓶，每瓶225 mL ，121℃高壓滅菌15min。

 

十三、緩沖蛋白胨水（BP）

成分：

蛋白胨 10g

氯化鈉 5g

磷酸氫二鈉 9g

磷酸二氫鉀 1.5g

蒸餾水1000mL

pH 7.2

制法：按上述成分配好后以大燒瓶裝，121℃高壓滅菌15min。臨用時(shí)無(wú)菌分裝每瓶225mL。

注：本培養(yǎng)基供沙門(mén)氏菌前增菌用。

十四、EC肉湯

成分：

胰蛋白胨 20g

3號(hào)膽鹽（或混合膽鹽）1.5g

乳糖 5g

磷酸氫二鉀 4g

磷酸二氫鉀 1.5g

氯化鈉 5g

蒸餾水 1000mL

制法：將上述成分混合，溶解后，分裝有發(fā)酵倒管的試管中，121℃高壓滅菌15min。最終pH為6.9±0.2。

 

十五、四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB）

基礎(chǔ)培養(yǎng)基

多胨或眎胨 5g

膽鹽 1g

碳酸鈣 10g

硫代硫酸鈉 3g

蒸餾水 1000mL

碘溶液

碘 6g

碘化鉀 5g

蒸餾水 20 mL

制法：將基礎(chǔ)培養(yǎng)基的各成分加入蒸餾水中，加熱溶解，分裝每瓶100mL。分裝時(shí)應(yīng)隨時(shí)振搖，使其中的碳酸鈣混勻，121℃高壓滅菌15min備用。臨用時(shí)每100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入碘溶液2mL，,0.1%煌綠溶液1mL。

 

十六、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）

成分：

蛋白胨 5g

乳糖 4g

亞硒酸氫鈉 4g

磷酸氫二鈉 5.5g

磷酸二氫鉀 4.5g

L-胱氨酸 0.01g

蒸餾水 1000mL

1% L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液的配法：稱(chēng)取L-胱氨酸0.1g或（DL-胱氨酸0.2g），加1mol/L氫氧化鈉1.5mL，使溶解，再加入蒸餾水8.5mL即成。

制法：將除亞硒酸氫鈉和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸餾水中，加熱煮沸，候冷備用。另將亞硒酸氫鈉溶解于100mL蒸餾水中，加熱煮沸，候冷，以無(wú)菌操作與上液混合。再加入1% L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液1mL。

分裝于滅菌瓶中．每瓶100mL，pH應(yīng)為7.0±0.1。

 

十七、亞硫酸鉍瓊脂（BS）

成分：

蛋白胨 10g

牛肉膏 5g

葡萄糖 5g

硫酸亞鐵 0.3g

磷酸氫二鈉 4g

煌綠 0.025g

檸檬酸鉍銨 2g

亞硫酸鈉 6g

瓊脂 18~20g

蒸餾水 1000mL

pH 7.5

制法：

1.將前面5種成分溶解于300mL蒸餾水中。

2將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉另用50mL蒸餾水溶解。

3將瓊脂于600mL蒸餾水中煮沸溶解，冷至80℃。

4將以上三液合并，補(bǔ)充蒸餾水至1000mL，校正pH，加0.5%煌綠水溶液5mL，搖勻，冷至50～55℃，傾注平皿。

注：此培養(yǎng)基不需高壓滅菌。制備過(guò)程不宜過(guò)分加熱，以免降低其選擇性。應(yīng)在臨用前一天制備，貯存于室溫暗處，超過(guò)48h不宜使用。

 

十八、三糖鐵瓊脂（TSI）

成分：

蛋白胨 20g

牛肉膏 5g

乳糖 10g

蔗糖 10g

葡萄糖 1g

氯化鈉 5g

硫酸亞鐵銨 0.2g

硫代硫酸鈉 0.2g

瓊脂 12g

酚紅 0.025g

蒸餾水 1000 mL

pH 7.4 

制法：將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，校正pH，加入瓊脂，加熱煮沸，以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5 mL，搖勻，分裝試管。裝量宜多些，以便得到較高的底層。121℃高壓滅菌15min，放置高層斜面?zhèn)溆谩?/span>

 

十九、三糖鐵瓊脂換用方法

成分：

蛋白胨15g

眎胨5g

牛肉膏 3g

酵母膏 3g

乳糖 10g

蔗糖 10g

葡萄糖 1g

氯化鈉 5g

硫酸亞鐵 0.2g

硫代硫酸鈉 0.3g

瓊脂 12g

酚紅 0.025g

蒸餾水 1000 mL

pH7.4

制法：將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，校正pH，加入瓊脂，加熱煮沸，以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5 mL，搖勻，分裝試管，裝量宜多些，以便得到較高的底層。121℃高壓滅菌15min，放置高層斜面?zhèn)溆谩?/span>

 

二十、嗜鹽性試驗(yàn)培養(yǎng)基

成分：

蛋白胨2g

氯化鈉 按不同量加

蒸餾水100 mL

pH7.7

制法：配制2%蛋白胨水，校正pH，共配制5瓶，每瓶100mL。每瓶分別加入不同量的氯化鈉：（1）不加；（2）3g；（3）7g；（4）9g；（5）11g。待溶解后分裝試管，121℃高壓滅菌15min。