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      原代細(xì)胞骨架的染色方法

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2013-08-29  來源:實(shí)驗(yàn)室資訊網(wǎng)
      核心提示:微絲的顯示方法步驟: 1. 用PBS液漂洗蓋片培養(yǎng)的原代細(xì)胞3次,每次30s; 2. 用2%的甲醛/PBS液固定原代細(xì)胞3min; 3. 用0.5
       微絲的顯示方法步驟:
            1.  用PBS液漂洗蓋片培養(yǎng)的原代細(xì)胞3次,每次30s;
            2.  用2%的甲醛/PBS液固定原代細(xì)胞3min;
            3.  用0.5%的三硝基甲苯/PBS處理3次,每次10min;
            4.  PBS漂洗3次;
            5.  用羅丹明(rhodamine)標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽(phalloidin)(1:10)室溫中反應(yīng)15min;
            6.  PBS漂洗3次;
            7.  60%甘油+熒光防淬劑封片;
            8.  熒光顯微鏡觀察;
       
       微管的顯示方法:
            1.  用PBS液漂洗蓋玻片的原代細(xì)胞3次,每次30s;
            2.  在室溫中用3%甲醛/PBS固定20min;
            3.  用PBS液再漂洗3次,每次1min,最后用濾紙吸干多余的PBS液;
            4.  投入冷丙酮中(-10—-20℃)7min;
            5.  用PBS漂洗3次,每次1min,最后用濾紙吸干多余的PBS液;
            6.  向直徑6cm的干凈碟皿中央滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的一級抗微管蛋白抗體,令小蓋片細(xì)胞面向下扣在抗體液上,覆以皿蓋,于37℃溫箱中放置45min—1h;
            7.  向碟皿內(nèi)勻速緩慢滴加PBS,令蓋片浮起在液面,用鑷子夾出,按步驟3處理;
            8.  向干凈碟皿中央滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的熒光標(biāo)記的二抗,其后操作按步驟6進(jìn)行;
            9.  按步驟7和3操作;
            10. 滴pH8.5的90%的甘油/PBS少許于載玻片上,把小蓋片的原代細(xì)胞面覆在大蓋片上;
            11. 將蓋片置于熒光顯微鏡下觀察;
       
      編輯:songjiajie2010

       
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      關(guān)鍵詞: 原代細(xì)胞 骨架 染色方法
       

       
       
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