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      3M大腸菌群快速檢驗測試片操作以及判讀

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-05-15
       
      3M大腸菌群快速檢驗測試片操作以及判讀
      一、測試大腸菌群 操作方法  
      1. 未開封時,冷藏于≤8℃(≤46℉),并在保存期內用完,高溫度時,凝固水可以排除,包裝物最好于室溫啟開。 2. 已開封的,將封口以膠帶封緊。
      3. 已啟開的包裝袋不要冷藏并于一個月內使用完。 4. 制備食物樣品稀釋液,稱取或吸取食物樣品,置入適宜的無菌容器內,如均質袋、稀釋瓶、WhirlPak bag或者其他滅菌容器內.
      5. 加入適量的無菌稀釋液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4調PH7.2) 、0.1%的旦白膠水(ISO方法6887) 、緩沖旦白膠水(ISO方法6579) 、鹽溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸餾水. 但不可用含有枸櫞酸鹽、bisulfite or thiosulfate的緩沖液. 因為它能抑止菌生長。

      6、攪拌或均質樣品.

      樣品的稀釋液調PH6.6-7.2對酸性樣用IN NaOH、堿性樣用INHCI調PH。

      7、將測試片置于平坦表面處,揭開上層膜。 8、使用吸管將1ml樣液垂直滴加在測試片的中央處。
      9、細心將上層膜緩慢蓋下,避免有氣光泡產生,切勿使上層膜直接落下。 10、使用壓板(平面底朝下)放置在上層膜中央處。
      11、輕輕的壓下,使樣液均勻覆蓋于圓形的培養(yǎng)面積上,切勿扭轉壓板。 12、拿起壓板,靜置至少1分鐘以使培養(yǎng)基凝固。

      14、可目視及用標準菌落計數器或其它的照明放大鏡計數,并可參考判讀卡計算菌落數。

      15、可以分離菌落作進一步鑒定,即掀起上層膜,由培養(yǎng)膠上挑取單個菌落。
      13、測試片的透明面朝上,可堆疊至20片。培養(yǎng)時間和溫度因方法而有不同,最通用的認可方法是:
      總大腸菌群
      AOAC官方方法986.33和989.10(乳/生乳和其它乳制品)
      大腸菌群:32℃±1℃培養(yǎng)24±2h
      AOAC官方方法991.14(食品類)
      大腸菌群:35℃±1℃培養(yǎng)24±2h
      NMKL方法(147.1993)
      大腸菌群:37℃±1℃培養(yǎng)24±2h
      AFNOR認可方法3M 01/2-09/89A和B(除水生貝殼類動物外的所有食品)
      大腸菌群:30℃±1℃培養(yǎng)24±2h

      耐熱的(糞)大腸菌群
      AFNOR認可方法,3M 01/2-09/89C(所有食品) 44℃±1℃培養(yǎng)24±2h。當提高培養(yǎng)溫度時,培養(yǎng)箱應有一定的濕度是需要的。
       
      二、測試大腸菌群 判讀方法  

      Petrifilm ColiformTM Coliform測試片含有VRB培養(yǎng)劑 (Violet Red Bile),一種冷水可溶性的凝膠劑和四唑翁(tetrazollium)指示劑,可增強菌落計數效果。表面覆蓋的膠膜,可留住發(fā)酵乳糖的大腸菌群產生的氣體。

      AOAC和FDA細菌學分析手冊(RAM)規(guī)定大腸菌群為革蘭氏陰性桿菌,發(fā)酵乳糖產酸產氣。大腸菌群菌落在Petrifilm CC測試片上生長產酸,PH指示劑使培養(yǎng)基顏色變深,在紅色菌落周圍有氣泡者,為大腸菌群細菌。

      大腸菌群簽定,在不同國家可以有變更
      (見培養(yǎng)時間和溫度部分提示).

      AOAC確認的方法:
      Total coliform= 69 (有氣泡的菌落)
      No growth=0
      注意圖2到圖5培養(yǎng)基顏色的變化,隨著coliform 菌數增多,培養(yǎng)基顏色變深,背景的泡(沫)
      為培養(yǎng)基現象,不是大腸菌群生長結果.
      Total coliform count=79
      Petrifilm cc 測試片菌落數適宜記數范圍是15-150,不要計算圓型培基外的菌落,因為泡棉上已不含選擇性培養(yǎng)基.見圓圈1
      Estimated total coliform count=220
      測試片面積約為20cm2,當菌落數超過150個,為了估計菌落數可選擇其中一個或數個有代表性菌落的小方格(1cm2)計算平均菌落數,在乘以20方向得到整個測試片上的菌落數.
      菌落太多時需進一步稀釋樣品,方能獲得準確計數.
      TNTC(菌數太多無法計數)
      Petrifilmcc測試片菌落無法計數時至少有下列現象之一.(1)很多小菌落(2)有許多氣泡(3)培養(yǎng)的顏色深暗.
      Acrual coun=4
      當有大量的非大腸菌群細菌如假單胞菌屬細菌存在時,Petrifilmcc測試片培養(yǎng)基顏色呈黃色.
      Total coliform count=2
      食物顆粒為不規(guī)規(guī)則形狀,且不帶氣泡.
      Total coliform count=8
      氣泡可有不同形狀,氣泡可使菌落撐散,使菌落輪廓似氣泡,見圓圈1和2,人為的氣泡可能是不當的操作所至,或是來自樣品捏的氣體,他們成不規(guī)則形狀,且不與菌落相連接.見圓圈3.
      例如,1-10示為不同類型氣泡與菌落的連接情況,所有菌落應計數.
       
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