可用于ELISA實(shí)驗(yàn)樣本有血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、尿液、唾液、腦脊液等。不同的樣本類型有不同的處理方法。
5. 組織勻漿
(1) 用預(yù)冷的 PBS(0.01M,PH7.4)沖洗組織以除去表面殘留的血液或雜質(zhì)。
(2) 將組織塊稱重,然后切成盡可能小的碎塊,以便充分勻漿。
(3) 加入適量的預(yù)冷 PBS(體積取決于組織的重量,9 mL PBS 適用于 1 g 組織,建議使用前立即在 PBS 中加入適量蛋白酶抑制劑),用玻璃勻漿器在冰上或冰浴中充分勻漿。
(4) 將勻漿液吸入離心管中,4℃ 下以 5000×g 離心 5~10 分鐘,收集上清液,保存至-20℃或-80℃, 避免反復(fù)凍融。
一般來說,由于 ELISA 實(shí)驗(yàn)只能檢測(cè)可溶性蛋白質(zhì)的含量,因此要求樣本應(yīng)清晰透明并離心除去沉淀物或懸浮物質(zhì)。為確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性,-20℃或-80℃保存的樣本應(yīng)在 1~6個(gè)月內(nèi)完成檢測(cè),4℃保存的樣本在一周內(nèi)完成檢測(cè)。