聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR) 是分子生物學(xué)領(lǐng)域功能強(qiáng)大的技術(shù)之一。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 是在標(biāo)準(zhǔn) PCR 技術(shù)基礎(chǔ)上演變而成,常用于定量樣本中的 DNA 或RNA。利用熒光探針或熒光 DNA 結(jié)合染料,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀檢測(cè)熒光并完成 PCR 反應(yīng)所需的熱循環(huán),實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增產(chǎn)物的定量。實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 分析的部分實(shí)施需要經(jīng)過(guò)優(yōu)化以確保所有反應(yīng)參數(shù)均設(shè)置精確,從而獲得準(zhǔn)確的結(jié)果。
盡管引物和探針的儲(chǔ)存經(jīng)常被忽略,但其在保證實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 分析的長(zhǎng)期成功和一致性方面具有重要作用。影響引物和探針的穩(wěn)定性的主要因素是儲(chǔ)存溫度、儲(chǔ)存時(shí)間、是否被長(zhǎng)時(shí)間暴光、儲(chǔ)存的引物和探針的濃度以及儲(chǔ)存溶液的組分。