玻璃儀器
正確的使用各種玻璃儀器對(duì)于減少人員傷害事故及保證實(shí)驗(yàn)室的安全是非常重要的。實(shí)驗(yàn)室中不允許使用破損的玻璃儀器。對(duì)于不能修復(fù)的玻璃儀器,應(yīng)當(dāng)按照廢物處理。在修復(fù)玻璃儀器前應(yīng)清除其中所殘留的化學(xué)藥品。實(shí)驗(yàn)室人員在使用各種玻璃器皿時(shí),應(yīng)注意以下事項(xiàng):
(1)在橡皮塞或橡皮管上安裝玻璃管時(shí),應(yīng)戴防護(hù)手套。先將玻璃管的兩端用火燒光滑,并用水或油脂涂在接口處作潤(rùn)滑劑。對(duì)粘結(jié)在一起的玻璃儀器,不要試圖用力拉,以免傷手。
(2)破碎玻璃應(yīng)放入利器盒(供應(yīng)室可領(lǐng)利器盒)處理。較大的破碎玻璃應(yīng)放入專門的加厚箱子,并封裝好,貼明警示標(biāo)識(shí),等待學(xué)院處理。破碎玻璃在放入垃圾桶前,應(yīng)用水沖洗干凈。
(3)不要將加熱的器皿放在過(guò)冷的臺(tái)面上,以防止溫度急劇變化而引起玻璃儀器破碎。
生物安全柜
1、應(yīng)參考國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)文獻(xiàn),對(duì)所有可能的使用者都介紹生物安全柜的使用方法和局限性。應(yīng)當(dāng)發(fā)給工作人員書面的規(guī)章、安全手冊(cè)或操作手冊(cè)。特別需要明確的是,當(dāng)出現(xiàn)溢出﹑破損或不良操作時(shí),安全柜就不再能保護(hù)操作者。
2、生物安全柜運(yùn)行正常時(shí)才能使用。
3、生物安全柜在使用中不能打開玻璃觀察擋板。
4、安全柜內(nèi)應(yīng)盡量少放置器材或標(biāo)本,不能影響后部壓力排風(fēng)系統(tǒng)的氣流循環(huán)。
5、安全柜內(nèi)不能使用本生燈,否則燃燒產(chǎn)生的熱量會(huì)干擾氣流并可能損壞過(guò)濾器。允許使用微型電加熱器,但最好使用一次性無(wú)菌接種環(huán)。
6、所有工作必須在工作臺(tái)面的中后部進(jìn)行,并能夠通過(guò)玻璃觀察擋板看到。
7、盡量減少操作者身后的人員活動(dòng)。
8、操作者不應(yīng)反復(fù)移出和伸進(jìn)手臂以免干擾氣流。
9、不要使實(shí)驗(yàn)記錄本﹑移液管以及其他物品阻擋空氣格柵,因?yàn)檫@將干擾氣體流動(dòng),引起物品的潛在污染和操作者的暴露。
10、工作完成后以及每天下班前,應(yīng)使用適當(dāng)?shù)南緞⿲?duì)生物安全柜的表面進(jìn)行擦拭。
11、在安全柜內(nèi)的工作開始前和結(jié)束后,安全柜的風(fēng)機(jī)應(yīng)至少運(yùn)行5min。
12、在生物安全柜內(nèi)操作時(shí),不能進(jìn)行文字工作。
13、通過(guò)在生物安全柜內(nèi)人工產(chǎn)生微生物(枯草桿菌芽孢) ,在生物安全柜外用培養(yǎng)皿采集枯草桿菌芽孢判定生物安全柜對(duì)工作人員的防護(hù)能力。
超凈臺(tái)
1、使用前15-20分鐘用75%酒精擦拭工作臺(tái)面,將實(shí)驗(yàn)所需的物品放于臺(tái)面中間工作區(qū)的兩側(cè),使用的移液器吸頭、試管、培養(yǎng)皿等均事先滅菌。
2、使用前15-20分鐘開紫外燈,對(duì)工作區(qū)域進(jìn)行照射殺菌,將細(xì)菌、病毒全部殺死。為避免物品過(guò)多而導(dǎo)致紫外滅菌不徹底,臺(tái)面平時(shí)只需放移液器、75%酒精噴壺、75%酒精棉、接種器、酒精燈、記號(hào)筆和打火機(jī)等。
3、使用前10分鐘將通風(fēng)機(jī)啟動(dòng),以排除臭氧等有害氣體。
4、操作時(shí)將照明燈開關(guān)打開,關(guān)掉殺菌燈。
5、操作前用75%酒精棉擦洗雙手和前臂。任何進(jìn)入超凈臺(tái)的物品都必須經(jīng)過(guò)75%酒精擦拭后才可進(jìn)入超凈臺(tái)。
6、工作臺(tái)面不要存放不必要的物品,以保持工作區(qū)的潔凈氣流不受干擾。打開各種瓶蓋前先過(guò)火,以固定灰塵,打開的瓶口、試管口過(guò)火,鑷子、接種器使用前應(yīng)經(jīng)火灼燒以再除菌。
7、不要在工作臺(tái)面上記錄,工作時(shí)應(yīng)盡量避免明顯擾亂氣流的動(dòng)作。
8、工作完畢后,也必須以75%酒精擦拭臺(tái)面,并且將使用過(guò)的器具材料歸定位,垃圾清理干凈,停止風(fēng)機(jī)運(yùn)行,關(guān)掉照明燈,將上述不屬于超凈臺(tái)面的個(gè)人物品拿走。
9、操作員需嚴(yán)格按照上述規(guī)程實(shí)驗(yàn),使用移液器時(shí)用酒精棉擦拭移液器頭。吸頭等用前需用報(bào)紙包好并滅菌,且僅限個(gè)人使用。
10、為配合發(fā)酵工作,避免染菌,超凈臺(tái)周圍需定期進(jìn)行打掃并消毒。用福爾馬林(40%甲醛)加少量高錳酸鉀定期對(duì)房間進(jìn)行密閉熏蒸。
注:超凈臺(tái)進(jìn)風(fēng)口的背面或正面的下方,金屬網(wǎng)罩內(nèi)有一普通泡沫塑料片或無(wú)紡布,用以阻擋大顆粒塵埃,應(yīng)常檢查、拆洗,如發(fā)現(xiàn)泡沫塑料老化,要及時(shí)更換。工作臺(tái)面正面的金屬網(wǎng)罩內(nèi)是超級(jí)濾清器,超級(jí)濾清器也可更換,如因使用年久,塵粒堵塞,風(fēng)速減小,不能保證無(wú)菌操作時(shí),則可換上新的。
培養(yǎng)箱
培養(yǎng)箱是培養(yǎng)微生物的主要設(shè)備,可用于細(xì)菌、細(xì)胞的培養(yǎng)繁殖。其原理是應(yīng)用人工的方法在培養(yǎng)箱內(nèi)造成微生物和細(xì)胞、細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的人工環(huán)境,如控制一定的溫度、濕度、氣體等。培養(yǎng)箱使用過(guò)程整體要注意以下幾點(diǎn):
1、培養(yǎng)箱應(yīng)放置在清潔整齊、干燥通風(fēng)的工作間內(nèi),箱內(nèi)的培養(yǎng)物不宜放置過(guò)擠,之間應(yīng)保持適當(dāng)間隔,以利冷(熱)空氣的對(duì)流循環(huán)。無(wú)論放入或取出物品應(yīng)隨手關(guān)門,以免溫度波動(dòng)。
2、帶有制冷壓縮機(jī)的要遵守冰箱保養(yǎng)的注意事項(xiàng),如保持電壓穩(wěn)定、不要過(guò)度傾斜、不要短時(shí)間內(nèi)反復(fù)開關(guān)儀器、及時(shí)清掃散熱器上的灰塵等。
3、隔水式培養(yǎng)箱應(yīng)注意先加水再通電,同時(shí)應(yīng)經(jīng)常檢查水位,及時(shí)添加水。
4、開關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)箱要小心,培養(yǎng)箱打開后要盡快關(guān)上,先要扭緊玻璃門,再關(guān)上培養(yǎng)箱門。培養(yǎng)箱鐵架子和盛水托盤要定時(shí)高壓滅菌處理。隨時(shí)留意最底層的盛水托盤,必要時(shí)補(bǔ)充高壓滅菌水。隨時(shí)留意細(xì)胞培養(yǎng)箱二氧化碳濃度,必要時(shí)立即更換二氧化碳鋼瓶。
搖床
1、電源必須有可靠的保護(hù)接地線,禁止非專業(yè)人員拆卸電器控制部分。
2、儀器長(zhǎng)時(shí)間低溫運(yùn)行時(shí),要注意除霜或按期做加熱驅(qū)潮處理。
3、搖床高速旋轉(zhuǎn)工作時(shí),為避免儀器產(chǎn)生大的振動(dòng),所占的培養(yǎng)試劑瓶應(yīng)在搖臺(tái)上對(duì)稱放置,各瓶的培養(yǎng)液應(yīng)大致相等。
4、儀器長(zhǎng)期不用時(shí),特別是在雨季或潮濕季節(jié),應(yīng)定期通電運(yùn)行5-8h以驅(qū)除設(shè)備電氣元件吸附的水分。
5、帶有制冷壓縮機(jī)的要遵守冰箱保養(yǎng)的注意事項(xiàng),如保持電壓穩(wěn)定、不要過(guò)度傾斜、不要短時(shí)間內(nèi)反復(fù)開關(guān)儀器、及時(shí)清掃散熱器上的灰塵等。
6、務(wù)必將東西放牢,并在啟動(dòng)前確認(rèn)別人的東西已經(jīng)放牢。
7、一定要在搖床開啟直至生至最大轉(zhuǎn)速后,搖床運(yùn)行平穩(wěn)后才能離開。
8、若不慎將液體灑出,一定要將其擦干凈,防止滋生雜菌。
9、若有東西掉入機(jī)芯或卡在搖板底下無(wú)法清理,請(qǐng)關(guān)閉搖床轉(zhuǎn)移所有培養(yǎng)物,并第一時(shí)間告知負(fù)責(zé)人。嚴(yán)禁帶故障運(yùn)行。
移液器
移液器操作規(guī)范和使用注意事項(xiàng):
1、設(shè)定移液體積
從大量程調(diào)節(jié)至小量程為正常調(diào)節(jié)方法,逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)刻度即可;從小量程調(diào)節(jié)至大量程時(shí),應(yīng)先調(diào)至超過(guò)設(shè)定體積刻度,再回調(diào)至設(shè)定體積,這樣可以保證移液器的精確度。
2、裝配移液槍頭
將移液槍垂直插入吸頭,左右旋轉(zhuǎn)半圈,上緊即可。用移液器撞擊吸頭的方法是非常不可取的,長(zhǎng)期這樣操作回導(dǎo)致移液器的零件因撞擊而松散,嚴(yán)重會(huì)導(dǎo)致調(diào)節(jié)刻度的旋鈕卡住搜索。
3、吸液及放液
垂直吸液,吸頭尖端浸入液面3mm以下,吸液前槍頭先在液體中預(yù)潤(rùn)洗;慢吸慢放,放液時(shí)如果量很小則應(yīng)吸頭尖端可靠容器內(nèi)壁。
4、吸有液體的移液槍不應(yīng)平放,槍頭內(nèi)的液體很容易污染槍內(nèi)部而可能導(dǎo)致槍的彈簧生銹。
5、移液槍在每次實(shí)驗(yàn)后應(yīng)將刻度調(diào)至最大,讓彈簧回復(fù)原型以延長(zhǎng)移液槍的使用壽命。
6、吸取液體時(shí)一定要緩慢平穩(wěn)地松開拇指,絕不允許突然松開,以防將溶液吸入過(guò)快而沖入取液器內(nèi)腐蝕柱塞而造成漏氣。
7、為獲得較高的精度,吸頭需預(yù)先吸取一次樣品溶液,然后再正式移液,因?yàn)槲⊙宓鞍踪|(zhì)溶液或有機(jī)溶劑時(shí),吸頭內(nèi)壁會(huì)殘留一層”液膜”,造成排液量偏小而產(chǎn)生誤差。
8、濃度和粘度大的液體,會(huì)產(chǎn)生誤差,為消除其誤差的補(bǔ)償量,可由試驗(yàn)確定,補(bǔ)償量可用調(diào)節(jié)旋鈕改變讀數(shù)窗的讀數(shù)來(lái)進(jìn)行設(shè)定。
9、可用分析天平稱量所取純水的重量并進(jìn)行計(jì)算的方法,來(lái)校正取液器,1mL 蒸餾水20℃時(shí)重0.9982g。
10、在設(shè)置量程時(shí),請(qǐng)注意旋轉(zhuǎn)到所需量程,數(shù)字清清楚楚在顯示窗中,所設(shè)量程在移液器量程范圍內(nèi)不要將按鈕旋出量程,否則會(huì)卡住機(jī)械裝置,損壞了移液器。
11、移液器嚴(yán)禁吸取有強(qiáng)揮發(fā)性、強(qiáng)腐蝕性的液體(如濃酸、濃堿、有機(jī)物等)。
12、不要用大量程的移液器移取小體積的液體,以免影響準(zhǔn)確度。同時(shí),如果需要移取量程范圍以外較大量的液體,請(qǐng)使用移液管進(jìn)行操作。
移液器的校準(zhǔn)方法:
1、準(zhǔn)備超純水、萬(wàn)分之一天平(如果校正0.5~2.5ul量程的,至少要十萬(wàn)分之一的天平)、溫濕度計(jì)、恒溫室,還需準(zhǔn)備一個(gè)小口容器,防止水分揮發(fā)。
2、按移液器總量程的100%、50%、10%分別進(jìn)行第三和第四步。
3、吸頭要反復(fù)吸取超純水三次后,吸取固定容積的超純水,推入放置在天平上的小口容器中,待數(shù)據(jù)穩(wěn)定讀取天平數(shù)值,同時(shí)記錄溫度。重復(fù)10次。
4、將測(cè)量的數(shù)據(jù)用iso8655中的計(jì)算公式計(jì)算獲得對(duì)應(yīng)溫度下的體積,取平均值。
5、根據(jù)三個(gè)測(cè)量點(diǎn)的偏差,用移液器專用的校正扳手(不同品牌的移液器的校正窗和扳手的形式是不同)通過(guò)移液器的校正窗進(jìn)行調(diào)整。
6、重復(fù)3、4步,直至偏差在ISO8655的要求內(nèi)為止。
如果是電動(dòng)移液器,那校正就簡(jiǎn)單多了,一般測(cè)量完三個(gè)校正點(diǎn)的數(shù)據(jù)后,直接進(jìn)入校正界面,將誤差數(shù)據(jù)輸入就可以自動(dòng)校正了。
一般還是交給廠家或者代理商進(jìn)行校正比較放心,一般地區(qū)總代都是購(gòu)買了自動(dòng)校正平臺(tái)的,將移液器放在上面,機(jī)器自動(dòng)進(jìn)行測(cè)量和校正工作的。
熒光生物顯微鏡
顯微鏡的操作方法及注意事項(xiàng)
1、使用分析測(cè)試中心顯微鏡,必須預(yù)約和登記。開機(jī)先開顯微鏡電源,需要用熒光時(shí)再開熒光;開機(jī)后,放上待觀察樣品,首先明場(chǎng)觀察(bright field)時(shí),請(qǐng)選擇合適的物鏡,物鏡倍數(shù)從小到大觀察。將樣品置于載物臺(tái)上,調(diào)節(jié)高度和亮度。轉(zhuǎn)動(dòng)載物臺(tái)時(shí),請(qǐng)輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)。用完需將亮度調(diào)到最低再離開。
2、觀察熒光時(shí),首先打開熒光光源,等待幾分鐘后再觀察。選擇合適的激發(fā)光,觀察完必須將熒光關(guān)閉再離開。
3、拍攝圖像時(shí),在相連接的電腦上打開相應(yīng)軟件,將顯微鏡的相應(yīng)旋鈕打到view上,調(diào)節(jié)曝光時(shí)間等參數(shù)。用完需要將光源和照相機(jī)關(guān)閉。
4、用完后,請(qǐng)核對(duì)是否關(guān)閉熒光光源和顯微鏡電源,聚光鏡是否蓋上蓋子,載物臺(tái)是否放置低位,物鏡是否調(diào)至無(wú)物鏡對(duì)準(zhǔn)載物臺(tái),然后罩上目鏡,蓋上紅布袋防灰塵。
5、請(qǐng)?jiān)谟涗洷旧先鐚?shí)登記。
6、儀器的光源是有壽命的,請(qǐng)本著節(jié)約原則,完成實(shí)驗(yàn)時(shí)請(qǐng)及時(shí)關(guān)燈。若兩次使用間隔時(shí)間短可以不必關(guān)燈,若間隔時(shí)間長(zhǎng)請(qǐng)及時(shí)關(guān)燈。因?yàn)榻?jīng)常開關(guān)儀器也會(huì)影響光源壽命。
7、物鏡不可用手或者其他物體觸摸。所以觀察樣品盡量蓋蓋玻片,如果沒蓋蓋玻片的請(qǐng)務(wù)必注意樣品不得沾到并污染物鏡,若不小心污染了物鏡,請(qǐng)及時(shí)用擦鏡紙按“水→70%乙醇→100%乙醇”步驟從中心向外螺旋轉(zhuǎn)圈清理對(duì)應(yīng)物鏡。
成像系統(tǒng)
凝膠成像分析系統(tǒng)可以應(yīng)用在蛋白電泳凝膠,DNA凝膠,樣品進(jìn)行圖像采集并進(jìn)行定性和定量分析。
使用注意事項(xiàng):
1、注意開機(jī)順序,先開凝膠成像系統(tǒng),再打開電腦進(jìn)入軟件。
2、紫外凝膠照相時(shí)要防止EB污染儀器,凝膠成像系統(tǒng)的門不能用污染的手套接觸,進(jìn)行軟件操作時(shí)同樣不能被污染的手套接觸。
3、在使用紫外光源照相的過(guò)程中,不可以打開凝膠成像系統(tǒng)前面板。
4、照相后將廢膠取出,并用較軟的紙擦拭干凈。
5、調(diào)焦時(shí)要輕,動(dòng)作不要?jiǎng)×摇?/span>
6、保持觀測(cè)室內(nèi)環(huán)境干燥,及時(shí)將遺留在觀測(cè)板上的水或其他液體檫干。
7、使用儀器時(shí),要將門及觀測(cè)臺(tái)關(guān)緊,否則將無(wú)法正常使用紫外燈。
8、盡可能不要將電腦連接到因特網(wǎng)或局域網(wǎng)上,同時(shí)在電腦上安裝殺毒軟件,做到專機(jī)專用。
9、較長(zhǎng)時(shí)間不用儀器時(shí),請(qǐng)將儀器用防塵罩蓋上。
10、為延長(zhǎng)燈管的使用壽命,請(qǐng)觀測(cè)好凝膠后及時(shí)關(guān)閉光源。
pH計(jì)
pH計(jì)使用注意事項(xiàng):
1、儀器標(biāo)定校正的次數(shù)取決于試樣、電極性能及對(duì)測(cè)量的精確度要求,一般經(jīng)一次標(biāo)定后可連續(xù)使用一周或更長(zhǎng)時(shí)間,pH計(jì)校準(zhǔn)時(shí)使用對(duì)應(yīng)校準(zhǔn)液,按照儀器說(shuō)明書校準(zhǔn),在下列情況時(shí),儀器必須重新標(biāo)定:
(a)長(zhǎng)期未用的電極和新?lián)Q的電極。
(b)測(cè)量濃酸(pH<2)以后,或測(cè)量濃堿(ph>12)以后。
(c)測(cè)量含有氟化物的溶液和較濃的有機(jī)溶液以后。
(d)被測(cè)溶液溫度與標(biāo)定時(shí)的溫度相差過(guò)大時(shí)。
2、pH電極前端的保護(hù)瓶?jī)?nèi)有適量電極浸泡溶液,電極頭浸泡其中,以保持玻璃球泡和液接界的活化。測(cè)量時(shí)旋松瓶蓋,拔出電極,用純水洗凈即可使用。使用后再將電極插進(jìn)并旋緊瓶蓋,以防止溶液滲出,如發(fā)現(xiàn)保護(hù)瓶中的浸泡液有混濁,發(fā)霉現(xiàn)象,應(yīng)及時(shí)洗凈,并調(diào)換新的浸泡液。
3、電極浸泡液的配制:電極浸泡液即為3MKCl。電極應(yīng)避免長(zhǎng)期浸泡在純水、蛋白質(zhì)溶液和酸性氟化物溶液中,并防止和有機(jī)硅油脂接觸。
4、經(jīng)常保持儀器的清潔和干燥,特別要注意保持電計(jì)、電極插口的高度清潔和干燥,否則將導(dǎo)致測(cè)量失準(zhǔn)或失效,如有沾污可用醫(yī)用棉花和無(wú)水酒精揩凈并吹干。
5、復(fù)合電極前端的敏感玻璃球泡,不能與硬物接觸,任何破損和擦毛都會(huì)使電極失效。測(cè)量前和測(cè)量后都應(yīng)用純水清洗電極,清洗后將電極甩干,不要用紙巾擦試球泡,這樣會(huì)使電極電位不穩(wěn)定,延長(zhǎng)響應(yīng)時(shí)間。在粘稠性試樣中測(cè)定后,電極需用純水反復(fù)沖洗多次,以除去粘在玻璃膜上的試樣,或先用適宜的溶劑清洗,再用純水洗去溶劑。
6、電極經(jīng)長(zhǎng)期使用,或被測(cè)溶液中含有易污染敏感玻璃球泡或堵塞液接界的物質(zhì),而使電極鈍化,其現(xiàn)象是敏感梯度降低,響應(yīng)慢,讀數(shù)不準(zhǔn),可根據(jù)不同情況采取下列措施:
(a)玻璃球泡污染老化:將電極用0.1mol/L稀鹽酸浸泡24小時(shí),用純水洗凈,然后再用電極浸泡液浸泡24小時(shí),如果鈍化比較嚴(yán)重,也可將電極下端浸泡在4% HF(氫氟酸)中3~5秒種,用純水洗凈,然后在電極浸泡液中浸泡24小時(shí),使之復(fù)新。
(b)玻璃球泡和液接界污染的清洗:(供參考)
污染物 清洗劑
無(wú)機(jī)金屬氧化物 低于1mol/L稀酸
有機(jī)油脂類物 稀洗滌劑(弱堿性)
樹脂高分子物質(zhì) 稀酒精、乙醚
蛋白質(zhì)血球沉淀物 酸性酶溶液(如食母生片)
顏料類物質(zhì) 稀漂白液、過(guò)氧化物
電極外殼的材料是聚碳酸酯,選用清洗劑時(shí)請(qǐng)注意,如四氯化碳、三氯乙稀、四氫呋喃等請(qǐng)慎用,因?yàn)檫@些試劑會(huì)溶解聚碳酸酯材料,從而使電極失效。
7、儀器一般配有三瓶pH校正溶液(pH4.00、pH6.86和pH9.18各一瓶),這三瓶不同顏色的校正緩沖溶液內(nèi)含防霉消毒劑,因此可以在環(huán)境溫度下長(zhǎng)期存放而不變質(zhì)。
8、pH電極電極斜率低于85% 時(shí)(視測(cè)試精度和范圍而定,且校正緩沖溶液要準(zhǔn)確),則應(yīng)考慮對(duì)電極進(jìn)行活化處理或更換電極。