1.彎曲菌屬的主要特點(diǎn)及分類
彎曲菌屬(Campylobacter) 是一類呈逗點(diǎn)狀或S形的革蘭陰性桿菌,廣泛分布于動(dòng)物界,其中有些可引起動(dòng)物和人類的腹瀉、胃腸炎和腸道外感染。
目前彎曲菌屬共有18個(gè)菌種和亞種,引起人類疾病的主要是空腸彎曲菌空腸亞種,其次是胎兒彎曲菌和大腸彎曲菌等。
2.細(xì)菌特性
(1)形態(tài)染色 本屬細(xì)菌為革蘭陰性無芽孢的彎曲短桿菌,不易染色,菌體彎曲呈S狀或海鷗展翅狀等,一端或兩端各有一根鞭毛,運(yùn)動(dòng)活潑,暗視野顯微鏡下呈“投標(biāo)樣”運(yùn)動(dòng)。
(2)培養(yǎng)特性 微需氧菌,最適生長(zhǎng)環(huán)境是含氧氣5%、二氧化碳10%、氮?dú)?5%;孵育溫度通常取決于所需要分離的菌株,在不同的溫度下培養(yǎng)基的選擇性也不同,通常絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室用42℃作為初始分離溫度,這一溫度對(duì)空腸彎曲菌、大腸彎曲菌的生長(zhǎng)有利,相反其他菌株在37℃生長(zhǎng)良好。
營養(yǎng)要求高,在普通培養(yǎng)基上不生長(zhǎng),分離彎曲菌常用的選擇性培養(yǎng)基大多含有抗生素(主要為頭孢哌酮),以抑制腸道正常菌群。常用的有含血的Skirrow培養(yǎng)基、頭孢哌酮-萬古霉素-兩性霉素瓊脂培養(yǎng)基(CVA)和不含血的碳-頭孢哌酮-去氧膽酸鹽(CCDA)、碳基選擇性培養(yǎng)基(CSM)和半固體動(dòng)力培養(yǎng)基等。
(3)生化反應(yīng) 氧化酶和觸酶陽性,可還原硝酸鹽為亞硝酸鹽,不分解和不發(fā)酵各種糖類,不分解尿素,具體生化反應(yīng)見表13-1。
(4)抵抗力 本屬細(xì)菌的抵抗力弱,對(duì)一般消毒劑敏感,但耐寒,在4℃冰箱或水中可存活達(dá)4周。
注:+,>90%陽性;-,<10%陽性;V,可變;ND,未定;W,反應(yīng)較弱;S,敏感;R,耐藥
3.臨床意義
彎曲菌的傳播途徑主要為食物和水,傳播方式多為經(jīng)口傳播,食用未煮熟的雞、飲用未經(jīng)處理的水和未經(jīng)消毒的牛奶均可引起彎曲菌腸炎的發(fā)生。本菌具有黏附定居和入侵上皮細(xì)胞的能力,通過產(chǎn)生的腸毒素、細(xì)胞毒素和內(nèi)毒素等多種毒力因子致病,病變部位通常在空腸、回腸,也可蔓延至結(jié)腸。
空腸彎曲菌空腸亞種是彎曲菌中最重要也是最常見的的人體致病菌(占彎曲菌腹瀉的80%~90%),腹瀉是空腸彎曲菌感染最常見的臨床表現(xiàn)。除腸炎外,近年來也出現(xiàn)了空腸彎曲菌繼發(fā)關(guān)節(jié)炎敗血癥、腦膜炎和格林巴利綜合征。GBS病人分離到的空腸彎曲菌大都具有特殊的血清型O:19,可與人體的神經(jīng)組織發(fā)生交叉免疫反應(yīng)而致病。
胎兒彎曲菌主要引起腸道外感染,其中胎兒亞種和貓、綿羊的感染性流產(chǎn)關(guān)系密切,較少引起人類感染,感染人體常引起全身癥狀。
4.微生物學(xué)檢驗(yàn)
(1)檢驗(yàn)程序
(2)標(biāo)本采集 可采集糞便、肛拭子及剩余食物,標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢,或?qū)?biāo)本接種于卡-布運(yùn)送培養(yǎng)基中送檢;對(duì)于高燒和患腦膜炎的病人,可于用藥前抽取靜脈血或腦脊液,注入布氏肉湯中送檢。
(3)檢驗(yàn)方法
1)顯微鏡檢查 ①懸滴法動(dòng)力檢查:顯微鏡下觀察有無螺旋狀或投標(biāo)樣運(yùn)動(dòng),腦脊液標(biāo)本經(jīng)離心沉淀后再制成懸滴標(biāo)本檢查;②染色標(biāo)本檢查:取新鮮糞便或腦脊液離心沉淀物涂片、革蘭染色,查找革蘭陰性、彎曲呈S狀或螺旋狀桿菌,鞭毛染色見一端或兩端單根鞭毛;
2)分離培養(yǎng) 可將標(biāo)本直接接種于選擇性培養(yǎng)基上,也可將標(biāo)本過濾后培養(yǎng),彎曲菌形成的菌落為灰色、扁平、表面濕潤(rùn)、圓形凸起、邊緣不規(guī)則,常沿穿刺線蔓延生長(zhǎng)的菌落,在血平板上不溶血。本屬細(xì)菌在布氏肉湯中呈均勻混濁生長(zhǎng)。培養(yǎng)時(shí)需注意氣體環(huán)境和適合的溫度,空腸彎曲菌最適的溫度為42℃~43℃,胎兒彎曲菌在42℃不生長(zhǎng)。
3)鑒定 彎曲菌屬的鑒定比較復(fù)雜,必須綜合多種試驗(yàn)才能確定。通常在彎曲菌選擇培養(yǎng)基上氧化酶陽性、革蘭染色陰性、彎曲呈S形或螺旋形的細(xì)菌初步鑒定為彎曲菌,進(jìn)一步的鑒定試驗(yàn)有:①馬尿酸鹽水解試驗(yàn):本試驗(yàn)是鑒別空腸彎曲菌空腸亞種和多氏亞種的重要試驗(yàn),在彎曲菌選擇性培養(yǎng)基上經(jīng)42℃孵育,氧化酶陽性、有特征性的彎曲菌形態(tài)、輔以馬尿酸鹽試驗(yàn)陽性即可報(bào)告為空腸彎曲菌空腸亞種;②醋酸吲哚水解試驗(yàn):本試驗(yàn)空腸彎曲菌為陽性而胎兒彎曲菌為陰性;③萘啶酸、頭孢噻吩耐藥試驗(yàn):空腸彎曲菌和大腸彎曲菌對(duì)萘啶酸敏感,對(duì)頭孢噻吩耐藥;胎兒彎曲菌對(duì)萘啶酸耐藥而對(duì)頭孢噻吩敏感。近來出現(xiàn)了對(duì)萘啶酸耐藥的空腸彎曲菌和大腸彎曲菌,應(yīng)結(jié)合馬尿酸鹽水解試驗(yàn)進(jìn)行鑒定。
彎曲菌的其余鑒定試驗(yàn)有:不同溫度的生長(zhǎng)試驗(yàn)(25℃、37℃、42℃)、觸酶試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、產(chǎn)H2S試驗(yàn)等(見表13-1)。
(4)耐藥性 由于彎曲菌感染大多呈輕癥和自限性,一般不需特異性治療。體外試驗(yàn)顯示,絕大多數(shù)彎曲菌對(duì)頭孢菌素和青霉素耐藥,環(huán)丙沙星治療彎曲菌感染非常有效,但近年來也出現(xiàn)了不少耐藥菌株。空腸彎曲菌通常對(duì)紅霉素敏感,其耐藥率小于5%;而80%以上的大腸彎曲菌對(duì)紅霉素耐藥。胎兒彎曲菌引起的全身感染可用紅霉素、氨芐西林、氨基糖苷類和氯霉素治療。