反轉(zhuǎn)錄病毒載體是常用的病毒載體之一。反轉(zhuǎn)錄病毒的DNA基因組的兩端各有一個長末端重復(fù)序列(5'—LTR和3'—LTR)，有一個包裝病毒顆粒時必需的非編碼序列ψ+，同時有三個編碼蛋白質(zhì)的基因gag、pol和env。反轉(zhuǎn)錄病毒載體可以容納外源DNA的長度在10 kb左右，以很高的轉(zhuǎn)染率感染宿主細(xì)胞，特別是分裂中的細(xì)胞。轉(zhuǎn)入宿主的細(xì)胞后，反轉(zhuǎn)錄病毒載體隨即整合到宿主細(xì)胞基因組內(nèi)，這種整合的位點是隨機的。反轉(zhuǎn)錄病毒載體在構(gòu)建時，刪去了poi、env基因和gag基因的3’端，但保留了病毒顆粒所需的ψ+序列。其目的是在于提高載體的安全性，防止反轉(zhuǎn)錄病毒進入宿主細(xì)胞后進行增殖并包裝成病毒顆粒對宿主細(xì)胞造成可能的傷害。這樣，在制備反轉(zhuǎn)錄病毒載體時，就必須有一個輔助細(xì)胞系，這種細(xì)胞內(nèi)有缺陷型病毒可以提供包裝用的外殼蛋白，但自身沒有包裝信號。這樣，反轉(zhuǎn)錄病毒載體就可利用這些外殼蛋白包裝成病毒顆粒在輔助細(xì)胞系內(nèi)大量擴增。反轉(zhuǎn)錄病載體多半用于基因治療，由于病毒載體在宿主細(xì)胞基因組上隨機插入，人們擔(dān)心會引起不安全的后果，這種載體還在不斷改進之中。