一、抗生素除菌法:用BM-1(截耳素衍生物)和BM-2(四環(huán)素衍生物)抑制支原體
1.抗生素制備:均可用PBS配成250×濃縮液-20℃?zhèn)溆,使用濃度參考《組織培養(yǎng)和分子細(xì)胞學(xué)技術(shù)》117頁(yè)表6-2。
2.處理:取受支原體污染的細(xì)胞,吸除培養(yǎng)液,加入含BM-1的1640培養(yǎng)液培養(yǎng)3天后,吸除培養(yǎng)液,再加入含BM-2的1640培養(yǎng)液培養(yǎng)4天,如此連續(xù)三個(gè)輪回。
3.檢測(cè):用33258熒光染色鏡檢(每個(gè)輪回末應(yīng)檢測(cè)一次)。
4.培養(yǎng):清除支原體后的細(xì)胞,在不加上述抗生素的培養(yǎng)液中,再傳代培養(yǎng)3~4次。
5.鏡檢:如清除不徹底可再進(jìn)行處理至純凈為止(一般3個(gè)輪回即能被完全消除)。BM-1和BM-2與CIP(4-氟,2-羥基喹啉)聯(lián)合應(yīng)用亦可,即先用含BIP培養(yǎng)液培養(yǎng)12天后,再按上述方法處理。
二、加溫除菌法:把受污染的細(xì)胞置41℃中作用5~10小時(shí)。
三、動(dòng)物體內(nèi)接種除菌法:把受支原體污染的腫瘤細(xì)胞接種在同種動(dòng)物皮下或腹腔中,借動(dòng)物免疫系統(tǒng)消滅支原體,而腫瘤細(xì)胞卻能在體內(nèi)繼續(xù)生長(zhǎng),待一定時(shí)間后,從體內(nèi)取出細(xì)胞再進(jìn)行培養(yǎng)繁殖。
四、巨噬細(xì)胞吞噬法:從動(dòng)物腹腔采取巨噬細(xì)胞,為排除其它細(xì)胞成分,可先進(jìn)行純化,然后再加入被支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)液中混合培養(yǎng)。在培養(yǎng)過(guò)程中,為檢查支原體是否已被消除干凈,可利用支持物培養(yǎng)法驗(yàn)證,取出支持物逐日染色、鏡檢觀察,至支原體已被消除干凈為止。