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      大腸桿菌感受態(tài)的制備及重組DNA的轉(zhuǎn)化

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-02

        1.感受態(tài)的制備
        (1)接種單菌落于2ml LB培養(yǎng)液中, 37℃過夜。
       。2)取0.25ml過夜菌入25ml LB培養(yǎng)液中,37℃振搖4~6h至A590=0.4~0.6。
       。3)倒入50ml管內(nèi),水浴10min,以2500~3000rpm離心5min,棄上清。
        (4)緩慢加入75mmol/L預(yù)冷CaCl25ml懸浮菌體,冰浴20min,同上離心棄上清。
       。5)緩慢加入75mmol/L預(yù)冷CaCl21.0ml輕輕混勻后分裝在1.5ml Eppendorf管中,每管200μl,冰浴1~2h。

        2.重組DNA的轉(zhuǎn)化
       。1)將3只Eppendorf管按下列轉(zhuǎn)化項目作好標記:
       。2)冰浴30min至1h。中間搖動3次,以防受體菌沉底。
       。3)42℃90s。
       。4)37℃水浴5min。
       。5)加入無相應(yīng)抗生素的Lb 200μl,混勻后,37℃水浴30~60min。
       。6)分別取3組反應(yīng)物各50μl在含相應(yīng)抗生素的固體LB培養(yǎng)基平皿上涂布,室溫下干燥,然后倒置于37℃溫箱中培養(yǎng)過夜。

       

       

       

       

       
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