1．收獲細(xì)菌

　�。�1）將2ml含相應(yīng)抗生素的LB液體培養(yǎng)基加入到通氣良好的15ml的試管中，接入一單菌落，于37℃劇烈振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。
　�。�2）將1.5ml培養(yǎng)物倒入1.5ml離心管中，用臺(tái)式離心機(jī)于4℃以12000g離心5min，將剩余的培養(yǎng)物貯存于4℃。
　�。�3）吸盡培養(yǎng)液，使細(xì)菌沉淀盡可能干燥。

　　2．堿裂解法小量抽提質(zhì)粒

　�。�1）將細(xì)菌沉淀[上述步驟（3）所得]重懸于100μl預(yù)冷的溶液Ⅰ（50mmol/L葡萄糖，25mmol/l Tris –HCl pH8.0, 10mmol/L EDTA）中，劇烈振蕩。
　�。�2）加200μl新配制的溶液Ⅱ（0.2mol/l NaOH, 1%SDS），緩和振蕩，水浴5min。
　　（3）加150μl預(yù)冷溶液Ⅲ（50mol/L KAC 60ml, 冰乙酸11.5ml,水28.5ml），緩和振蕩，冰浴5min。
　�。�4）4℃以12000g離心5min，將上清轉(zhuǎn)移到另一離心管中。
　�。�5）可作不可作：加等量飽和酚，氯仿，振蕩混勻，重復(fù)2，（4）。
　　（6）用2倍體積無(wú)水乙醇室溫沉淀雙鏈DNA，振蕩混合，于室溫放置2min。
　�。�7）4℃以12000g離心5min。
　�。�8）小心吸盡上清液，將離心管倒置于一張紙巾上，再將附于管壁的液滴除盡。
　　（9）用75%乙醇于4℃洗滌DNA，同上離心去上清真空抽干。
　　（10）加50μl的1×TE（含20μg/ml無(wú)DNA酶的胰RNA酶），振蕩，貯存于-20℃。