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      siRNAs制備的方法

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01

      目前為止較為常用的5種制備siRNAs的方法包括:

      1.化學(xué)合成

      2.體外轉(zhuǎn)錄

      3.長片斷dsRNAs經(jīng)RNase III 類降解

      4.siRNA表達(dá)載體或者病毒載體在細(xì)胞中表達(dá)siRNAs

      5.PCR制備的siRNA表達(dá)框在細(xì)胞中表達(dá)

      前三種方法經(jīng)過體外制備siRNAs然后應(yīng)用專門的RNA轉(zhuǎn)染試劑將siRNAs轉(zhuǎn)到細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染或者電轉(zhuǎn)染導(dǎo)入哺乳動物細(xì)胞;后兩種方法則這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)在于不需要直接操作RNA,依賴能夠表達(dá)siRNAs的DNA載體或者基于PCR的表達(dá)框架轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,通過轉(zhuǎn)染到細(xì)胞的DNA模板在體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄得到siRNAs。每種方法都有自己的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。哪種是最好的方法,其實取決于實驗?zāi)康摹?br />

      比較項目

      體外制備siRNA

      體內(nèi)表達(dá)siRNA

      化學(xué)合成

      體外轉(zhuǎn)錄

      RNase III降解dsRNA

      SiRNA

      表達(dá)載體

      PCR

      表達(dá)框

      設(shè)計和篩選最有效siRNA序列

      需要

      不需要

      需要

      材料需求

      21ntsiRNA

      29nt siDNA

      轉(zhuǎn)錄模版 (200-1000bp)

      45-50nt dsDNA

      ~50nt dsDNA

      制備規(guī)模

      大量

      受限

      大量

      受限

      合成/制備 轉(zhuǎn)染

      所需時間

      4-2

      dsDNA合成時間 1

      轉(zhuǎn)錄模版制備時間 1

      dsDNA合成時間 5天以上

      dsDNA合成時間 6小時

      個人所需操作時間

      幾乎沒有

      (只需定購)

      中等

      中等

      標(biāo)記siRNA

      進(jìn)行細(xì)胞定位

      不能

      轉(zhuǎn)染的難易程度

      專門的RNA轉(zhuǎn)染試劑或者電轉(zhuǎn)染

      DNA轉(zhuǎn)染,不直接操作RNA

      檢測總體轉(zhuǎn)染效率

      不能

      不能

      抑制時效(即穩(wěn)定性)

      短暫

      長期

      短暫

      制備費(fèi)用

      相對較低

      中等

       

       

       
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