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      PCR-SSCP法

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01
      PCR-SSCP法是在非這性聚丙烯酰胺凝膠上,短的單鏈DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同構(gòu)象,一個(gè)堿基的改變將影響其構(gòu)象而導(dǎo)致其在凝膠上的移動(dòng)速度改變。其基本原理為單鏈DNA在中性條件下會(huì)形成二級(jí)結(jié)構(gòu),這種二級(jí)結(jié)構(gòu)依賴于其堿基組成,即使一個(gè)堿基的不同,也會(huì)形成不同的二級(jí)結(jié)構(gòu)而出刺同的遷移率。由于該法簡(jiǎn)單快速,因而被廣泛用于未知基因突變的檢測(cè)。用PCR-SSCP法檢測(cè)小于200bp的PCR產(chǎn)物時(shí),突變檢出率可達(dá)70%-95%,片段大于400bp時(shí),檢出率僅為50%左右,該法可能會(huì)存在1%的假陽(yáng)性率。應(yīng)用PCR-SSCP法應(yīng)注意電泳的最佳條件,一般突變類型對(duì)檢測(cè)的靈敏度無(wú)大的影響,同時(shí)該法不能測(cè)定突變的準(zhǔn)確位點(diǎn),還需通過(guò)序列分析來(lái)確定。Sarkar等認(rèn)為對(duì)于大于200bp的片段,用其RNA分子來(lái)做SSCP會(huì)提高其錄敏度。應(yīng)用PCR-SSCP檢測(cè)點(diǎn)突變已見(jiàn)報(bào)道于人類大部分的腫瘤組織或細(xì)胞,如乳腺癌、食管癌、肺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌等。檢測(cè)的基因包括多種癌基因及抑癌基因,也是檢測(cè)抑癌基因p53突變最常用的方法,僅檢測(cè)第5-8外顯子即可發(fā)現(xiàn)85%以上的p53基因突變。由于該法簡(jiǎn)便快速,特別適合大樣本基因突變研究的篩選工作。
       

       

       
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