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      常用轉(zhuǎn)基因方法

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01

      直接注射法 將含有DNA的溶液直接注射到肌肉,以引起鄰近的細(xì)胞攝入DNA燕進(jìn)行表達(dá),在肌細(xì)胞中,基因表達(dá)可持續(xù)數(shù)月。

      磷酸鈣共沉淀法 將氯化鈣、DNA和磷酸鹽緩沖液混合,形成磷酸鈣微沉淀 ,附著于細(xì)胞膜并經(jīng)過細(xì)胞內(nèi)吞作用耐是入細(xì)胞質(zhì)。該方法的轉(zhuǎn)化效率通常很低。

      脂質(zhì)體染法 指質(zhì)體能在體內(nèi)或體外提供運載外源性遺傳物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的載體。脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移的最大優(yōu)勢在于能在活體內(nèi)應(yīng)用。

      受體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移 依靠受體介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)吞途徑以轉(zhuǎn)移外源基因。受體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移方法是在質(zhì)粒DNA和某種特異的多肽(配體)之間形成復(fù)合體,而這種多肽能為細(xì)胞表面的肥體所識別。如若將DNA在體內(nèi)運送至肝內(nèi),可以選將DNA和能與肝細(xì)胞受體特異結(jié)合的去唾液酸糖蛋白質(zhì)偶聯(lián),以便通過細(xì)胞內(nèi)吞過程而被攝入,這種DNA大部分被肝臟所攝取。應(yīng)用該方法轉(zhuǎn)移的外源基因在活體內(nèi)的表達(dá)持續(xù)時間較短,在評估實際應(yīng)用前影上還在一些問題。

      顯微注射法 在顯微鏡下,將DNA經(jīng)同細(xì)胞玻璃針地接注入細(xì)胞,該法適合于各種培養(yǎng)生長的細(xì)胞,但需要一定的設(shè)備和操作用支巧。

      電穿孔法 利用脈沖場將DNA導(dǎo)入培養(yǎng)細(xì)胞。

      微粒子轟擊法(基因槍)近幾年發(fā)展較快的轉(zhuǎn)移方法。使用高能微粒子轟擊將DNA導(dǎo)入培胞或活的哺乳動物組織內(nèi)。亞微粒的鎢和金能自發(fā)地吸附DNA,將這些微彈加強速到很的速度轟擊細(xì)胞。實驗結(jié)果表明,用這種方法靶基因可在皮膚、肌肉、肝、胰、胃和乳腺等細(xì)胞中表達(dá)。

      胚胎干細(xì)胞法 胚胎干細(xì)胞是從受精卵開始分裂至4個國胞階段未分化和具有多種潛能的生殖細(xì)胞,能在體外培養(yǎng),可作為正面細(xì)胞,制備轉(zhuǎn)基因動物,以研究基因定向整合或基因剔險及基因及能。

      精子載體法 最近發(fā)現(xiàn)用精子和NDA-劑孵育,可捕獲得DNA。通過受精過程,將外源性基因?qū)胧芫,可捕獲得物物,大大間化了轉(zhuǎn)基因動物的制備過程。

       

       

       
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