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      蛋白質(zhì)組學(xué)入門--HPLC 篇

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-28

      1 . HPLC 靈敏度不夠的主要原因及解決辦法
      樣品量不足:解決辦法為增加樣品量
      樣品未從柱子中流出:可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動相或柱子
      樣品與檢測器不匹配:根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器
      檢測器衰減太多:調(diào)整衰減即可。
      檢測器時間常數(shù)太大:解決辦法為降低時間參數(shù)
      檢測器池窗污染:解決辦法為清洗池窗。
      檢測池中有氣泡:解決辦法為排氣。
      記錄儀測壓范圍不當(dāng):調(diào)整電壓范圍即可。
      流動相流量不合適:調(diào)整流速即可。
      檢測器與記錄儀超出校正曲線:解決辦法為檢查記錄儀與檢測器,重作校正曲線。
      2 . 做 HPLC 分析時,柱壓不穩(wěn)定,原因何在? 如何解決?
      原因可能有: ?

      泵內(nèi)有空氣,解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣,對溶劑進行脫氣處理;
      比例閥失效,更換比例閥即可。
      泵密封墊損壞,更換密封墊即可。
      溶劑中的氣泡,解決的辦法是對溶劑脫氣,必要時改變脫氣方法;
      系統(tǒng)檢漏,找出漏點,密封即可。
      梯度洗脫,這時壓力波動是正常的。
      3 .我購買的 HPLC 柱驗收測試時柱壓過高,請問為什么?
      柱壓過高是 HPLC 柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的問題,您可按下面步驟檢查問題的起因。

      拆去保護柱,看柱壓是否還高,否則是保護柱的問題,若柱壓仍高,再檢查;
      把色譜柱從儀器上取下,看壓力是否下降,否則是管路堵塞,需清洗,若壓力下降,再檢查。
      將柱子的進出口反過來接在儀器上,用 10 倍柱體積的流動相沖洗柱子, ( 此時不要連接檢測器,以防固體顆粒進入流動性 ) 。這時,如果柱壓仍不下降,再檢查;
      更換柱子入口篩板,若柱壓下降,說明你的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì),正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高,請與廠商聯(lián)系。一般情況下,在進樣器與保護柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題, SGE 提供的 Rheodyne 7315 型過濾器就是解決這一問題的最佳選擇。
      4 .液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么?
      篩板堵塞或柱失效,解決辦法是反向沖洗柱子,替換篩板或更換柱子。
      存在干擾峰,解決辦法為使用較長柱子,改換流動相或更換選擇性好的柱子。

       

       

       
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