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      石蠟DNA提取

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-28

      1. 取蠟塊切片15-20張(8UM),置于EP管中,加入1ML的二甲苯,37度作用3小時(shí),10000×3分鐘,傾去二甲苯。重復(fù)3-4次,觀察管壁是否光滑。若有蠟質(zhì)殘存,需繼續(xù)脫蠟。
      2. 剃度酒精水化:100% 1ML,室溫30分鐘,10000×3分鐘,去上清;95%;75%;50%。
      3. 消化:1×SSC 500UL ,洗滌沉淀,12000×3M離心。干燥沉淀后加石蠟消化液 400UL,20mg/ml的PK 20ul;55度消化120小時(shí),至第四天,補(bǔ)加PK 10ul。
      4. 消化后見液體清亮,肉眼見組織較少。將其轉(zhuǎn)入98度的水浴箱煮沸10分鐘,以滅活PK,置冰上迅速冷卻,離心10000×5分鐘。
      5. 取上清加等量的酚-氯仿,輕顛倒混勻成乳白色,低溫離心,14000×10分鐘。小心取上清,再加等量的酚-氯仿,混勻,離心。
      6. 取上清加冰無水乙醇兩倍體積及1/10的乙酸鈉(PH 5。2),顛倒混勻。置-20度半小時(shí),14000×10分鐘低溫離心,去上清。
      7. 沉淀用70%的乙醇洗滌2次,(加1ML,顛倒EP管數(shù)次,14000×5分鐘,離心),自然干燥沉淀。
      8. 加TE20ul,(含RNA酶),4度過夜。

      20×SSC 配方:3mol/l Nacl ,0。3 M 檸檬酸三鈉·2H2O ,用HCL調(diào)PH值至7。0
      石蠟消化液:150nmol/l NacL:15mmol/l檸檬酸鈉,1%SDS,PH 7。0。

       

       

       
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