在把微細(xì)分散的固體或是附著于固體表面的液體作為固定相,把液體(與上述液體不相混合的)或氣體作為移動(dòng)相的系統(tǒng)中,使試料混合物中的各成分邊保持向兩相分布的平衡狀態(tài)邊移動(dòng),利用各成分對(duì)固定相親和力不同所引起的移動(dòng)速度差,將它們彼此分離開(kāi)的定性與定量分析方法,稱(chēng)為層析,亦稱(chēng)色譜法。根據(jù)移動(dòng)相種類(lèi)的不同,分為液體層析、氣體層析二種。用作固定相的有矽膠、活性炭、氧化鋁、離子交換樹(shù)脂、離子交換纖維等,或是在硅藻土和纖維素那樣的無(wú)活性的載體上附著適當(dāng)?shù)囊后w,也可使用其他物質(zhì)。將作為固定相的微細(xì)粉末狀物質(zhì)裝入細(xì)長(zhǎng)形圓筒中進(jìn)行的層析稱(chēng)為柱層析(column chromatogra-phy),在玻璃板上涂上一層薄而均的物質(zhì)作為固定相的稱(chēng)為薄層層析(thin-layer chromatography),后者可與用濾紙作為固定相的紙上層析進(jìn)行同樣的分析,即在固定相的一端,點(diǎn)上微量試料,在密閉容器中,使移動(dòng)相(液體)從此端滲入,移動(dòng)接近另一端。通過(guò)這種展開(kāi)操作,各成分呈斑點(diǎn)狀移動(dòng)到各自的位置上,再根據(jù)Rf值的測(cè)定進(jìn)行鑒定。當(dāng)斑點(diǎn)不易為肉眼觀(guān)察時(shí),可利用適當(dāng)?shù)娘@色劑,或通過(guò)紫外燈下產(chǎn)生熒光的方法進(jìn)行觀(guān)察。也可采用在第一種移動(dòng)相展開(kāi)后再用另一移動(dòng)相進(jìn)行展開(kāi)(這時(shí)的展開(kāi)方向應(yīng)與原方向垂直),使各成分分離完全的雙相層析(two-dimensional chromatography)。分離后,將斑點(diǎn)位置的固定相切取下來(lái),把其中含有來(lái)自試料的物質(zhì)提取進(jìn)行定量分析。但為制備與定量,柱層析則更為適宜。在柱層析中,移動(dòng)相從加入試料的一端展開(kāi)到達(dá)另一端后,繼續(xù)展開(kāi)使各成分和移動(dòng)相一起向柱外分別溶出,這就是廣泛使用的所謂洗提層析(elution chromatography)。層析根據(jù)固定相與溶質(zhì)(試料)間親和力的差異分為吸附型、分配型、離子交換型(離子交換層析)等三種類(lèi)型。但這并不是很?chē)?yán)格的,有時(shí)常見(jiàn)到其中間類(lèi)型。此外,近來(lái)也應(yīng)用親和層析,即將與基質(zhì)類(lèi)似的化合物(通常為共價(jià)鍵)結(jié)合到固定相上,再利用其特異的親和性沉淀與其對(duì)應(yīng)的特定的酶或蛋白質(zhì)。