国产精品二区按摩片,亚州另类欧美综合一区,亚洲日韩国产一区二区,国产在线观看片免费人成视频

<dfn id="yldih"></dfn>
  • <ul id="yldih"><td id="yldih"></td></ul>

  • <dfn id="yldih"></dfn>
    1. <dfn id="yldih"></dfn>
      <ul id="yldih"></ul>
      VIP標(biāo)識(shí) 上網(wǎng)做生意,首選VIP會(huì)員| 設(shè)為首頁(yè)| 加入桌面| | 手機(jī)版| RSS訂閱
      食品伙伴網(wǎng)服務(wù)號(hào)
       

      流式細(xì)胞儀的工作原理

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-07

       。1)參數(shù)測(cè)量原理:流式細(xì)胞計(jì)可同時(shí)進(jìn)行多參數(shù)測(cè)量,信息主要來(lái)自特異性熒光信號(hào)及非熒光散射信號(hào)。測(cè)量是在測(cè)量區(qū)進(jìn)行的,所謂測(cè)量區(qū)就是照射激光束和噴出噴孔的液流束垂直相交點(diǎn)。液流中央的單個(gè)細(xì)胞通過測(cè)量區(qū)時(shí),受到激光照射會(huì)向立體角為2π的整個(gè)空間散射光線,散射光的波長(zhǎng)和入射光的波長(zhǎng)相同。散射光的強(qiáng)度及其空間分布與細(xì)胞的大小、形態(tài)、質(zhì)膜和細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)密切相關(guān),因?yàn)檫@些生物學(xué)參數(shù)又和細(xì)胞對(duì)光線的反射、折射等光學(xué)特性有關(guān)。未遭受任何損壞的細(xì)胞對(duì)光線都具有特征性的散射,因此可利用不同的散射光信號(hào)對(duì)不經(jīng)染色活細(xì)胞進(jìn)行分析和分選。經(jīng)過固定的和染色處理的細(xì)胞由于光學(xué)性質(zhì)的改變,其散射光信號(hào)當(dāng)然不同于活細(xì)胞。散射光不僅與作為散射中心的細(xì)胞的參數(shù)相關(guān),還跟散射角、及收集散射光線的立體角等非生物因素有關(guān)。

        在流式細(xì)胞術(shù)測(cè)量中,常用的是兩種散射方向的散射光測(cè)量:①前向角(即0。角)散射(FSC);②側(cè)向散射(SSC),又稱90。角散射。這時(shí)所說的角度指的是激光束照射方向與收集散射光信號(hào)的光電倍增管軸向方向之間大致所成的角度。一般說來(lái),前向角散射光的強(qiáng)度與細(xì)胞的大小有關(guān),對(duì)同種細(xì)胞群體隨著細(xì)胞截面積的增大而增大;對(duì)球形活細(xì)胞經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明在小立體角范圍內(nèi)基本上和截面積大小成線性關(guān)系;對(duì)于形狀復(fù)雜具有取向性的細(xì)胞則可能差異很大,尤其需要注意。側(cè)向散射光的測(cè)量主要用來(lái)獲取有關(guān)細(xì)胞內(nèi)部精細(xì)結(jié)構(gòu)的顆粒性質(zhì)的有關(guān)信息。側(cè)向散射光雖然也與細(xì)胞的形狀和大小有關(guān),但它對(duì)細(xì)胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更為敏感,也能對(duì)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)較大顆粒給出靈敏反映。

        在實(shí)際使用中,儀器首先要對(duì)光散射信號(hào)進(jìn)行測(cè)量。當(dāng)光散射分析與熒光探針聯(lián)合使用時(shí),可鑒別出樣品中被染色和未被染色細(xì)胞。光散射測(cè)量最有效的用途是從非均一的群體中鑒別出某些亞群。

        熒光信號(hào)主要包括兩部分:①自發(fā)熒光,即不經(jīng)熒光染色細(xì)胞內(nèi)部的熒光分子經(jīng)光照射后所發(fā)出的熒光;②特征熒光,即由細(xì)胞經(jīng)染色結(jié)合上的熒光染料受光照而發(fā)出的熒光,其熒光強(qiáng)度較弱,波長(zhǎng)也與照射激光不同。自發(fā)熒光信號(hào)為噪聲信號(hào),在多數(shù)情況下會(huì)干擾對(duì)特異熒光信號(hào)的分辨和測(cè)量。在免疫細(xì)胞化學(xué)等測(cè)量中,對(duì)于結(jié)合水平不高的熒光抗體來(lái)說,如何提高信噪比是個(gè)關(guān)鍵。一般說來(lái),細(xì)胞成分中能夠產(chǎn)生的自發(fā)熒光的分子(例核黃素、細(xì)胞色素等)的含量越高,自發(fā)熒光越強(qiáng);培養(yǎng)細(xì)胞中死細(xì)胞/活細(xì)胞比例越高,自發(fā)熒光越強(qiáng);細(xì)胞樣品中所含亮細(xì)胞的比例越高,自發(fā)熒光越強(qiáng)。

        減少自發(fā)熒光干擾、提高信噪比的主要措施是:①盡量選用較亮的熒光染料;②選用適宜的激光和濾片光學(xué)系統(tǒng);③采用電子補(bǔ)償電路,將自發(fā)熒光的本底貢獻(xiàn)予以補(bǔ)償。

       。2)樣品分選原理:流式細(xì)胞計(jì)的分選功能是由細(xì)胞分選器來(lái)完成的?偟倪^程是:由噴嘴射出的液柱被分割成一連串的小水滴,根據(jù)選定的某個(gè)參數(shù)由邏輯電路判明是否將被分選,而后由充電電路對(duì)選定細(xì)胞液滴充電,帶電液滴攜帶細(xì)胞通過靜電場(chǎng)而發(fā)生偏轉(zhuǎn),落入收集器中;其它液體被當(dāng)作廢液抽吸掉,某些類型的儀器也有采用捕獲管來(lái)進(jìn)行分選的。

        穩(wěn)定的小液滴是由流動(dòng)室上的壓電晶體在幾十KHz的電信號(hào)作用下發(fā)生振動(dòng)而迫使液流均勻斷裂而形成的。一般液滴間距約距約數(shù)百μm。實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)公式f=v/4.5d給出形成穩(wěn)定水滴的振蕩信號(hào)頻率。其中v是液流速度,d為噴孔直徑。由此可知使用不同孔徑的噴孔及改變液流速度,可能會(huì)改變分選效果。使分選的含細(xì)胞液滴在靜電場(chǎng)中的偏轉(zhuǎn)是由充電電路和偏轉(zhuǎn)板共同完成的。充電電壓一般選 150V,或-150V;偏轉(zhuǎn)板間的電位差為數(shù)千伏。充電電路中的充電脈沖發(fā)生器是由邏輯電路控制的,因此從參數(shù)測(cè)定經(jīng)邏輯選擇再到脈沖充電需要一段延遲時(shí)間,一般為數(shù)十ms。精確測(cè)定延遲時(shí)間是決定分選質(zhì)量的關(guān)鍵,儀器多采用移位寄存器數(shù)字電路來(lái)產(chǎn)生延遲。可根據(jù)具體要求予以適當(dāng)調(diào)整。

       。3)數(shù)據(jù)處理原理:FCM的數(shù)據(jù)處理主要包括數(shù)據(jù)的顯示和分析,至于對(duì)儀器給出的結(jié)果如何解釋則隨所要解決的具體問題而定。

        ①數(shù)據(jù)顯示:FCM的數(shù)據(jù)顯示方式包括單參數(shù)直方圖(histogram)、二維點(diǎn)圖(dot plot)、二維等高圖(contour )、假三維圖(pseudo 3D)和列表模式(list mode)等。
        直方圖是一維數(shù)據(jù)用昨最多的圖形顯示形式,既可用于定性分析,又可用于定量分析,形同一般X—Y平面描圖儀給出的曲線。根據(jù)選擇放大器類型不同,橫座標(biāo)可以是線性標(biāo)度或?qū)?shù)標(biāo)度,用“道數(shù)”(Channel No .)來(lái)表示,實(shí)質(zhì)上是所測(cè)的熒光或散射光的強(qiáng)度。縱座標(biāo)一般表示的是細(xì)胞的相對(duì)數(shù)。
        二維點(diǎn)圖能夠顯示兩個(gè)獨(dú)立參數(shù)與細(xì)胞相對(duì)數(shù)之間的關(guān)系。橫座標(biāo)和縱座標(biāo)分別為與細(xì)胞有關(guān)的兩個(gè)獨(dú)立參數(shù),平面上每一個(gè)點(diǎn)表示同時(shí)具有相應(yīng)座標(biāo)植的細(xì)胞存在(圖10-3)。可以由二維點(diǎn)圖得到兩個(gè)一維直方圖,但是由于兼并現(xiàn)象存在,二維點(diǎn)圖的信息量要大于二個(gè)一維直方圖的信息量。所謂兼并就是說多個(gè)細(xì)胞具有相同的二維座標(biāo)在圖上只表現(xiàn)為一個(gè)點(diǎn),這樣對(duì)細(xì)胞點(diǎn)密集的地方就難于顯示它的精細(xì)結(jié)構(gòu)。
        二維等高圖類似于地圖上的等高線表示法。它是為了克服二維點(diǎn)圖的不足而設(shè)置的顯示方法。等高圖上每一條連續(xù)曲線上具有相同的細(xì)胞相對(duì)或絕對(duì)數(shù),即“等高”。曲線層次越高所代表的細(xì)胞數(shù)愈多。一般層次所表示的細(xì)胞數(shù)間隔是相等的,因此等高線越密集則表示變化率越大,等高線越疏則表示變化平衡。
        假三維圖是利用計(jì)算機(jī)技術(shù)對(duì)二維等高圖的一種視覺直觀的表現(xiàn)方法。它把原二維圖中的隱座標(biāo)—細(xì)胞數(shù)同時(shí)顯現(xiàn),但參數(shù)維圖可以通過旋轉(zhuǎn)、傾斜等操作,以便多方位的觀察“山峰”和“谷地”的結(jié)構(gòu)和細(xì)節(jié) ,這無(wú)疑是有助于對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析的。
        ②數(shù)據(jù)分析:數(shù)據(jù)分析的方法總的可分為參數(shù)方法和非參數(shù)方法兩大類。當(dāng)被檢測(cè)的生物學(xué)系統(tǒng)能夠用某種數(shù)學(xué)模型技術(shù)時(shí)則多使用參數(shù)方法。數(shù)學(xué)模型可以是一個(gè)方程或方程組,方程的參數(shù)產(chǎn)生所需要的信息來(lái)自所測(cè)的數(shù)據(jù)。例如在測(cè)定老鼠精子的DNA含量時(shí),可以獲取細(xì)胞頻數(shù)的尖銳波形分布。如果采用正態(tài)分布函數(shù)來(lái)描述這些數(shù)據(jù),則參數(shù)即為面積、平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差。方程的數(shù)據(jù)擬合則通常使用最小二乘法。而非參數(shù)分析法對(duì)測(cè)量得到的分布形狀不需要做任何假設(shè),即采用無(wú)設(shè)定參數(shù)分析法。分析程序可以很簡(jiǎn)單,只需要直觀觀測(cè)頻數(shù)分布;也可能很復(fù)雜,要對(duì)兩個(gè)或多個(gè)直方圖逐道地進(jìn)行比較。

        逐點(diǎn)描圖(或用手工,或用描圖儀、計(jì)算機(jī)系統(tǒng))是大家常用的數(shù)據(jù)分析的重要手段。我們?梢杂脕(lái)了解數(shù)據(jù)的特性、尋找那些不曾預(yù)料的特異征兆、選擇統(tǒng)計(jì)分析的模型、顯示最終結(jié)果等。事實(shí)上,不經(jīng)過先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行直觀觀察分析就決不應(yīng)該對(duì)這批數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)值分析。從這一點(diǎn)來(lái)看,非參數(shù)分析是參數(shù)分析的基礎(chǔ)。

        逐道比較工作量較大,但用直觀法很容易發(fā)現(xiàn)明顯的差異,特別是對(duì)照組和測(cè)試組?紤]到FCM的可靠性,要注意到對(duì)每組測(cè)量,都要有對(duì)照組,對(duì)照組可以是空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組、或零時(shí)刻對(duì)照組等,具體設(shè)置應(yīng)根據(jù)整體實(shí)驗(yàn)要求而定。對(duì)照組和測(cè)試組的逐道比較往往可以減少許多不必要的誤差和錯(cuò)誤解釋。順便指出,進(jìn)行比較時(shí)對(duì)曲線的總細(xì)胞數(shù)進(jìn)行歸一化處理,甚至對(duì)兩條曲線逐道相減而得到“差結(jié)果曲線”往往是適宜的。

       

       

       
      推薦圖文
      推薦食品專題
      點(diǎn)擊排行
       
       
      Processed in 8.991 second(s), 1278 queries, Memory 4.01 M