貯存液 |
貯存溫度 |
反應(yīng)濃度 |
反應(yīng)緩沖液 |
溫度 |
預(yù)處理 |
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0.01mol/l tris(ph7.8) |
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鏈霉蛋白酶a |
20mg/ml |
-20℃(溶于水) |
1mg/ml |
0.01mol/l edta |
37℃ |
自消化b |
0.5% sds |
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0.01mol/l tris(ph7.8) |
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蛋白酶kc |
20mg/ml |
-20℃(溶于水) |
50μg/ml |
0.005mol/l edta |
37~56℃ |
無須預(yù)處理 |
0.5% sds |
a:鏈霉蛋白酶是從鏈球菌(streptomyces griseus)中分離到的一種絲氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。
b:自消化可消除dna酶和rna酶的污染,經(jīng)自消化的鏈酶蛋白酶的配制方法如下:把該酶的粉末溶解于10mmol./l tris·hcl(ph7.5)、10mmol/l nacl中,配成20mg/ml濃度,于37℃溫育1h。經(jīng)消化的鏈霉蛋白酶分裝成小份放在密封試管中,保存-20℃。
c:蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶,從林伯氏白色念球菌(tritirachium album limber)中純化得到。該酶有兩個(gè)ca2 結(jié)合位點(diǎn),它們離酶的活性中心有一定距離,與催化機(jī)理并無直接關(guān)系。然而,如果從該酶中除去ca2 ,由于出現(xiàn)遠(yuǎn)程的結(jié)構(gòu)變化,催化活性將喪失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質(zhì)。所以,蛋白酶k消化過程中通常加入edta(以抑制依賴于mg2 的核酸酶的作用)。但是,如果要消化對蛋白酶k具有較強(qiáng)耐性的蛋白,如角蛋白一類,則可能需要使用含有1mmol/l ca2 而不含edta的緩沖液。在消化完畢后、純化核酸前要加入egt(ph8.0)至終濃度為2mmol/l,以鰲合ca2 。