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      放射免疫測定胰島素

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-28

      材料及試劑

      1.胰島素標(biāo)準(zhǔn)品(不同濃度的)

      2125 I-胰島素

      3.抗血清

      4.第二抗體

      5.分析試劑 0.05 Mol/L pH7.4 PBS液+1%正常兔血清。

      6 -計(jì)數(shù)儀

      7.試管、加樣器、離心機(jī)等

      操作方法:

      1.按表進(jìn)行。

      胰島素RIA測定方法(單位:μu/ml)

      標(biāo)準(zhǔn)管

      待測管

      0

      10

      20

      40

      80

      160

      1

      2

      試管號

      12

      3,4

      5,6

      7,8

      910

      11,12

      13,14

      1516

      標(biāo)準(zhǔn)品(不同濃度)

      100

      100

      100

      100

      100

      100

      待測血清

      100

      100

      抗血清(二抗)

      100

      100

      100

      100

      100

      100

      100

      100

      分析試劑

      100

      100

      100

      100

      100

      100

      100

      100

      混勻,37溫育2h

      125 I-胰島素

      100

      100

      100

      100

      100

      100

      100

      100

      混勻,37溫育1h

      第二抗體

      100

      100

      100

      100

      100

      100

      100

      100

      混勻,37反應(yīng)30min

      2.測定和計(jì)算 反應(yīng)完畢后,將各管于室溫3 000 r/ min離心30min,仔細(xì)吸取上清液,收集于放射性廢液貯存容器內(nèi)。用 -計(jì)數(shù)儀分別測量各管沉淀物(B)的放射性強(qiáng)度(cpm),以兩管的cpm均值表示。再以第12管的cpm值為Bo,分別計(jì)算結(jié)合率(B%,即B/Bo×100%),用B%為縱坐標(biāo),不同濃度胰島素標(biāo)準(zhǔn)品為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后根據(jù)待檢管的B%,從標(biāo)準(zhǔn)曲線中即可查得胰島素的相應(yīng)含量。

       

       

       

       
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