醋酸纖維膜電泳是一項(xiàng)簡(jiǎn)便而又迅速的方法。它的優(yōu)點(diǎn)是：①電泳區(qū)帶分離清楚，比瓊脂平板電泳分辨率高；②可以定量；③樣品用量少，只需要幾微升即可。

材料與試劑

1．pH8.6離子強(qiáng)度0.05巴比妥緩沖液

2．0.5％氨基黑染色液

3．透明液：

冰醋酸 3 份

95％乙醇 2 份

混合即可

4．醋酸纖維膜

操作方法

1．將醋酸纖維膜條浸于巴比妥緩沖液中，浸透后用竹鑷子夾到濾紙上，吸去過(guò)多的水分。將膜的光滑面向下搭在電泳槽兩側(cè)的濾紙橋上，注意搭平。

2．加樣 用微量加樣器于負(fù)極端1.5cm處加樣1µl～3µl，注意樣品要成一條直線(xiàn)且垂直方向。也可用血球計(jì)數(shù)板蓋玻片蘸取樣品輕輕點(diǎn)上。

3．電泳 電壓10V/cm～15V/cm或0.4mA/cm～0.6mA/cm電泳45min～60min，至電泳區(qū)帶展開(kāi)約2.5cm～3.5cm時(shí)，關(guān)閉電源。

4．染色 將膜浸于氨基黑染色液中，染色數(shù)分鐘。

5．透明 將染色的醋酸纖維膜浸于透明液中，漂洗5min ~10min，至背景呈乳白色為止。為了防止膜上出現(xiàn)許多氣泡，可以逐漸升高透明液濃度10％、20％以至30％。

6．結(jié)果觀察及保存 透明后，將膜貼于玻璃上，干后取下，即可觀察結(jié)果并保存。

7．定量 將各區(qū)帶剪下，分別浸于4Mol/L NaOH 4ml中，振搖數(shù)次，約2h，色澤被浸出，于580nm～620nm比色，測(cè)出各區(qū)帶的OD值。同時(shí)剪一塊大小相似無(wú)蛋白的透明膜同樣處理，做為對(duì)照。

計(jì)算各區(qū)帶蛋白含量百分比（以血清為例）

總OD值T＝A α1 α2 β γ

白蛋白％=A/T×100％

以此類(lèi)推。

注意事項(xiàng)

1．醋酸纖維膜孔隙小，含水量少，且較薄，因此它對(duì)熱很敏感，故應(yīng)注意控制電壓、電流。

2．樣品不可過(guò)多，只需幾微升即可。

3．加樣一定要呈直線(xiàn)、垂直、分布均勻，這樣泳動(dòng)的區(qū)帶整齊、不歪。

4．注意醋酸纖維膜的質(zhì)量，浸泡很久仍有大塊白色硬點(diǎn)者可棄之不用。