以炭疽環(huán)狀沉淀反應(yīng)為例,此反應(yīng)又稱Ascoli氏反應(yīng)。
材料與試劑
1.已知炭疽沉淀血清,購(gòu)買自生物制品所。
2.待測(cè)炭疽沉淀抗原
3.試管5mm×50mm、滴管
4.0.3%石炭酸生理鹽水
操作方法
1.待測(cè)抗原的提取
(1)取可疑為炭疽而死的病畜的實(shí)質(zhì)臟器1g,放入試管或小三角燒瓶中,加生理鹽水5ml~10ml,煮沸30min~40min,冷卻后用濾紙過(guò)濾得清澈的液體,即為待測(cè)抗原。
(2)如病料是皮張,可采用冷浸法。將樣品高壓滅活后,剪成小塊并稱重,加約5倍的0.5%生理鹽水,室溫浸泡18h~24小時(shí),濾紙過(guò)濾,即為待檢抗原。
2.取試管5支(5mm×50mm)置于試管架上,編號(hào)。第1、2試管內(nèi)加炭疽沉淀血清,第3、4試管內(nèi)加正常血清,第5管內(nèi)加待檢抗原,分別用毛細(xì)滴管加至4mm~5mm。
3.第1、4、5試管輕輕疊加等量緩沖液,第2、3試管輕輕疊加等量待檢抗原。為防止上下兩界面破壞,可將小試管從試管架取出,微傾斜,沿試管壁加入緩沖液或抗原。
4.在試管架上靜置數(shù)分鐘,觀察結(jié)果。
結(jié)果判定
第2管內(nèi)兩液界面出現(xiàn)白色環(huán)狀沉淀帶,其余管無(wú)此種沉淀帶判為陽(yáng)性。
注意事項(xiàng)
1.反應(yīng)物必須清澈,如不清澈,可離心,取上清液或冷藏后使脂類物質(zhì)上浮,用吸管吸取底層的液體。
2.必須進(jìn)行對(duì)照觀察,以免出現(xiàn)假陽(yáng)性。
3.采用環(huán)狀沉淀反應(yīng),用以沉淀素效價(jià)滴定時(shí),可將抗原做100×,1 000×,2 000×,4 000×,8 000×等稀釋,分別疊加于抗血清上,以出現(xiàn)環(huán)狀沉淀的最大稀釋倍數(shù),即為該血清的沉淀素效價(jià)。