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      免疫中和反應(yīng)技術(shù)(Neutralization test technique):空斑減少法

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

      病毒或毒素與相應(yīng)的抗體結(jié)合后,失去對易感動物的致病力,謂之中和試驗(yàn)。本試驗(yàn)主要用于:從待檢血清中檢出抗體,或從病料中檢出病毒,從而診斷病毒性傳染。用抗毒素血清檢查材料中的毒素或鑒定細(xì)菌的毒素類型;測定抗病毒血清或抗毒素效價(jià);新分離病毒的鑒定和分型,中和試驗(yàn)不僅可在易感的實(shí)驗(yàn)動物體內(nèi)進(jìn)行,亦可在細(xì)胞培養(yǎng)上或雞胚上進(jìn)行。試驗(yàn)方法主要有簡單定性試驗(yàn)、固定血清稀釋病毒法、固定病毒稀釋血清法、空斑減少法等。

      在細(xì)胞培養(yǎng)上進(jìn)行病毒中和試驗(yàn),近年來多采用空斑減少法。先將病毒稀釋成適當(dāng)濃度,使每0.2ml80個~100PFU(空斑形成單位),與不同稀釋度的待檢血清等量混合,置37作用1h2h,分別測定PFU,使空斑減少50%血清稀釋度即為該血清的中和價(jià)。

      表 空斑減少法中和試驗(yàn)示例

      血清稀

      釋倍數(shù)[1]

      1:16

      (4-2)

      1:64

      (4-3)

      1:256

      (4-4)

      1:1024

      (4-5)

      1:409

      (4-6)

      不加

      血清

      對照

      中和抗

      體價(jià)[2]

      待檢血清A

      空斑數(shù)

      3

      13

      38

      51

      53

      55

      4-3.6=1:140

      空斑減少率

      95

      76

      31

      7

      0

      待檢血清B

      空斑數(shù)

      8

      25

      51

      56

      55

      4-4.1=1:290

      空斑減率數(shù)

      85

      54

      7

      0

      待檢血清C

      空斑數(shù)

      6

      22

      44

      55

      4-5.2=1:1300

      空斑減少率

      89

      59

      19

      注:[1] 血清用4倍遞增稀釋;

      [2] 空斑減少50%的血清稀釋度,其計(jì)算法同LD50的計(jì)算。

       

       

       
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