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      免疫中和反應(yīng)技術(shù)(Neutralization test technique):固定血清稀

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

      病毒或毒素與相應(yīng)的抗體結(jié)合后,失去對易感動物的致病力,謂之中和試驗(yàn)。本試驗(yàn)主要用于:從待檢血清中檢出抗體,或從病料中檢出病毒,從而診斷病毒性傳染。用抗毒素血清檢查材料中的毒素或鑒定細(xì)菌的毒素類型;測定抗病毒血清或抗毒素效價;新分離病毒的鑒定和分型,中和試驗(yàn)不僅可在易感的實(shí)驗(yàn)動物體內(nèi)進(jìn)行,亦可在細(xì)胞培養(yǎng)上或雞胚上進(jìn)行。試驗(yàn)方法主要有簡單定性試驗(yàn)、固定血清稀釋病毒法、固定病毒稀釋血清法、空斑減少法等。

      本法多將病毒作10倍遞增稀釋,分置2列試管,第一列加正常血清(對照組),第二列加待檢血清(試驗(yàn)組);旌虾螅37作用1h,將各管混合液分別接種選定的試驗(yàn)動物,每一稀釋度用35只動物。接種后,逐日觀察,并記錄其死亡數(shù),觀察結(jié)束后,計(jì)算LD50和中和指數(shù),本法適用于大量檢樣的檢測。

      表 固定血清稀釋病毒法術(shù)式

      混合前

      病毒稀釋

      2×10-1

      2×10-2

      2×10-3

      2×10-4

      2×10-5

      2×10-6

      2×10-7

      -

      正常

      血清

      稀釋病毒

      -

      -

      -

      1.0

      1.0

      1.0

      1.0

      -

      正常血清

      -

      -

      -

      1.0

      1.0

      1.0

      1.0

      1.0

      對照組

      稀釋液

      -

      -

      -

      -

      -

      -

      -

      1.0

      待檢血清

      稀釋病毒

      1.0

      1.0

      1.0

      1.0

      1.0

      1.0

      1.0

      -

      待檢血清

      1.0

      1.0

      1.0

      1.0

      1.0

      1.0

      1.0

      1.0

      中和組

      稀釋液

      -

      -

      -

      -

      -

      -

      -

      1.0

      混合后病

      毒稀釋

      10-1

      10-2

      10-3

      10-4

      10-5

      10-6

      10-7

      -

      表 固定血清稀釋病毒法中和試驗(yàn)(例)

      病毒稀釋

      10-1

      10-2

      10-3

      10-4

      10-5

      10-6

      10-7

      LD502

      中和指數(shù)

      正常血清對照組

      -

      -

      -

      441

      34

      14

      04

      10-5.5

      103.31.995

      待檢血清中和組

      44

      24

      14

      04

      04

      04

      04

      10-2.2

      注:[1]分母為接種數(shù),分子為死亡數(shù);

      2LD50計(jì)算見實(shí)例。

      中和指數(shù)=中和組LD50/對照組LD50=10-2.2/10-5.5=103.3

      3.3反對數(shù)是1.995,故中和指數(shù)103.31.995。也就是說該待檢血清中和病毒的能力為正常血清的1.995倍。本法多用以檢出待檢血清中的中和抗體,對病毒而言,通常中和指數(shù)大于50者判為陽性,1049為可疑,小于10為陰性。

       

       

       

       
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