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      western blotting的一些細(xì)節(jié)-1

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27
      勻漿緩沖液的問題:
      蛋白質(zhì)的勻漿緩沖液的一般配方都是大同小異,里面有那么多試劑,我對其中一些試劑的功能做了查尋:
      PMSF:蛋白酶抑制劑
      EDTA:金屬離子螯合劑
      DTT:保證蛋白SH基團(tuán)不被氧化
      礬酸鈉:酪氨酸磷酸酶抑制劑
      所以勻漿緩沖液的蛋白酶抑制劑保護(hù)劑對于保護(hù)蛋白質(zhì)量是非常重要的。
      蛋白勻漿以后是否還會(huì)降解?
      一般認(rèn)為蛋白質(zhì)勻漿以后,由于蛋白質(zhì)變性,所以不會(huì)容易降解。而且不會(huì)受反復(fù)凍融的影響。但實(shí)際上蛋白樣品反復(fù)凍融幾次后,蛋白量會(huì)明顯減少。所以最好不要使勻漿后的蛋白反復(fù)凍融,并且最好不要比較不同批次勻漿的蛋白樣品。
       

       

       
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