在體外的細胞培養(yǎng)中,單個的或數量很少的細胞不易生存與繁殖,必須加入其它活的細胞才能使其生長繁殖,加入的細胞稱之為飼養(yǎng)細胞(Feeder cell)。在細胞融合和單克隆的選擇過程中,就是在少量的或單個細胞的基礎上使其生長繁殖成群體,因此在這一過程中必須使用飼養(yǎng)細胞。許多種類的動物細胞都可以做飼養(yǎng)細胞,如正常的脾細胞、胸腺細胞、腹腔滲出細胞等,常選用腹腔滲出細胞,其中主要是巨噬細胞和淋巴細胞。應用腹腔滲出細胞的好處是:一方面做飼養(yǎng)細胞,另一方面巨噬細胞可以吞噬死亡的細胞和細胞碎片,為融合細胞的生長造成良好的環(huán)境。腹腔細胞的來源可以是與骨髓瘤細胞同系鼠。也可以是其他種類的小鼠,如C57鼠,昆明小白鼠等。
1.材料
(1)小鼠(Balb/c或C57小白鼠)若干只。
(2)11.6%蔗糖溶液(經10磅30min高壓滅菌)。
2.操作方法
(1)拉頸處死小鼠。
(2)70%酒精浸泡消毒10min。
(3)用手術剪將小鼠腹部剪開一小口,剝開皮膚,露出腹腔。
(4)用注射器將4ml 11.6%蔗糖溶液注入腹腔,用手指輕揉1min仍用該注射器回抽腹腔液體,加入離心管。
(5)1 000r/min離心10min。
(6)取上清,以HAT選擇培養(yǎng)液將細胞制成懸液。臺盼藍染色計數活細胞,使每毫升含40萬個活細胞。
(7)以1ml吸管將細胞種入微量培養(yǎng)皿,每孔0.05ml,含2萬個細胞,放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),即可供細胞融合和克隆化之用。如果在融合后發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)孔中飼養(yǎng)細胞數量少,則可以在細胞換液時再加入一些。
1.材料
(1)小鼠(Balb/c或C57小白鼠)若干只。
(2)11.6%蔗糖溶液(經10磅30min高壓滅菌)。
2.操作方法
(1)拉頸處死小鼠。
(2)70%酒精浸泡消毒10min。
(3)用手術剪將小鼠腹部剪開一小口,剝開皮膚,露出腹腔。
(4)用注射器將4ml 11.6%蔗糖溶液注入腹腔,用手指輕揉1min仍用該注射器回抽腹腔液體,加入離心管。
(5)1 000r/min離心10min。
(6)取上清,以HAT選擇培養(yǎng)液將細胞制成懸液。臺盼藍染色計數活細胞,使每毫升含40萬個活細胞。
(7)以1ml吸管將細胞種入微量培養(yǎng)皿,每孔0.05ml,含2萬個細胞,放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),即可供細胞融合和克隆化之用。如果在融合后發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)孔中飼養(yǎng)細胞數量少,則可以在細胞換液時再加入一些。