1.基本原理先將標(biāo)準(zhǔn)物或血樣品與抗血清混勻,免疫反應(yīng)6~24h,使抗原與抗體充分結(jié)合,甚至達(dá)到平衡,然后再加入標(biāo)記抗原,與抗體反應(yīng)12~24h,最后分離B與F,這稱為順序飽和分析法。
應(yīng)用順序飽和加樣,可以提高測定方法的靈敏度。Utiger在做人促甲狀腺激素(TSH)放射免疫分析時,將標(biāo)記物延至第2天加入,發(fā)現(xiàn)其靈敏度增加兩倍。如果縮短最后的溫育時間,仍可取得滿意的結(jié)果。所以一般認(rèn)為,在順序飽和加樣中,第1次溫育時間可以長,而第2次溫育時間要短,這樣可以提高靈敏度。但也有相反的意見,認(rèn)為順序飽和加樣,是使用過量抗體,會使靈敏度受到一定影響。如果使用抗體不過量,溫育時間縮短,在抗原和抗體結(jié)合未達(dá)到平衡飽和時就加入標(biāo)記物,這樣既不影響加靈敏度,反而比較穩(wěn)定,甚至可提高靈敏度。
2.加樣程序 以人血漿精氨酸加壓素RIA測定程序?yàn)槔ㄖ苯訙y定)。
(1)加樣(單位μl;總反應(yīng)體積600μl)
(2)孵育:4℃,24h。
。3)分離B與F。
無肽血漿,用于血漿的直接測定。其制備方法為:在電磁攪拌下,抽取2%加膜活性炭溶液5ml,共兩管,離心、去上清。血漿5ml,倒入上述活性炭管中,加蓋,充分振蕩10min,離心,上清倒入上述另一活性炭管中,振蕩10min,再離心,取上清,即無肽血漿。血漿中的生物活性物質(zhì)被活性炭吸附而去除。