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      IgA的分離與提純

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

      (一)材料與試劑配制
      1.DEAE52纖維素
      2.0.10Mol/L ZnSO4液
      ZnSO4·7H2O 2.88g
      加水至1 000.00ml
      3.飽和硫酸銨溶液
      4.10%EDTA—Na
      5.SephadexG200
      6.0.01Mol/L pH7.4PB液
      7.0.10Mol/L pH6.4PB液
      8.血清
      (二)操作方法
      1.取血清加等量的0.1Mol/L ZnSO4液,調(diào)pH至7.0,室溫?cái)嚢?h,離心去沉淀。
      2.于上清液中加入等量的飽和硫酸銨溶液,混勻后靜置30min或冰箱過夜。
      3.10 000r/min離心10min,去上清。
      4.取沉淀溶于4ml10%EDTA-Na溶液中。
      5.生理鹽水中透析除鹽。
      6.過DE52柱,用0.01Mol/L pH7.4PB液洗脫蛋白(IgG)棄去。
      7.換用0.1Mol/L pH6.4PB液洗脫,收集蛋白峰,即為IgA。
      8.再過SephadexG200柱,洗液為0.01Mol/L pH7.4PBS(0.14Mol/L NaCl),收集洗脫液測OD280值,取第一峰即為純化IgA。
      9.透析、濃縮、鑒定。

       

       

       
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