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      瓊脂糖凝膠電泳檢測調(diào)亡細(xì)胞

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08
      1.用不同方法誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡后,取106調(diào)亡細(xì)胞,置1.5ml離心管中,用PBS洗滌一次。在微量離心機(jī)上全速離心5秒鐘,去上清液。加入100μl含5mol/L異硫氰酸胍,100mmol/L 2-巰基乙醇的25mmol/L枸櫞酸鈉緩沖液pH7.0,在旋渦混懸器上混懸20秒鐘,破壞細(xì)胞,變性蛋白質(zhì)。
      2.加入50μl含7.5mol/L醋酸氨和0.8mg/ml糖原的水溶液,混勻;加入300μl 100%乙醇,4℃保存過夜。
      3.在微量離心機(jī)上全速離心30分鐘,去上清液。加入75%乙醇同樣離心洗滌沉淀物2次。用20μl含100μg/ml無DNA酶的RNA酶的TE緩沖液消化RNA,37℃ 30分鐘。加入10μl甘油和少量溴酚藍(lán),直接點(diǎn)樣。
      4.用50ml TAE溶解2g瓊脂糖,加入0.25μg/ml溴乙啶。倒板后加樣,用100bp DNA標(biāo)記物作為標(biāo)記。25mV電泳過夜。在紫外線下觀察結(jié)果。調(diào)亡細(xì)胞的DNA呈相差200bp的條帶的梯形圖。
       

       

       
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