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      BrdU標記法檢測細胞增殖

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08

      1.細胞以1.5×105/ml細胞數(shù)接種于直徑35ml培養(yǎng)皿中(內放置一蓋玻片),培養(yǎng)1天,用含0.4% FCS培養(yǎng)液同步化3天,使絕大多數(shù)細胞處于G0期。

      2.終止細胞培養(yǎng)前,加入BrdU(終濃度為30μg/L),37℃,孵育40min。

      3.棄培養(yǎng)液,玻片用PBS洗滌3次。

      4.甲醇/醋酸固定10min。

      5.經固定的玻片空氣干燥,0.3%H2O2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。

      6.5%正常兔血清封閉。

      7.甲酰胺100℃,5min變性核酸。

      8.冰浴冷卻后PBS洗滌,加1抗即抗小鼠BrdU單抗(工作濃度1:50),陰性對照加PBS或血清。

      9.按ABC法進行檢測,蘇木素或伊紅襯染,在顯微鏡下隨機計數(shù)10個高倍視野中細胞總數(shù)及BrdU陽性細胞數(shù),計算標記指數(shù)(LI)。


       

       

       
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