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(一)常用消毒劑 現(xiàn)將常用的消毒藥品及其配制、使用方法,介紹如下: 1.35%甲醛水溶液(HCHO):又名福爾馬林,使蛋白質(zhì)變性。用于培養(yǎng)室、無(wú)菌室的滅菌。 2.0.1%的升汞水(HgCL3):能使蛋白質(zhì)變性,抑制酶類。0.1%升汞配制方法是稱取升汞0.1克,用少許酒精溶解,再加水至100毫升即成。用于無(wú)菌箱、培養(yǎng)箱、培養(yǎng)皿四周表面以及手指的滅菌。 3.石炭酸(C6H5OH),5%濃度噴霧后,能使蛋白變性沉淀。石炭酸(苯酚)50毫升,加水950毫升配成。用于 工作服、實(shí)驗(yàn)桌的滅菌。殺菌效果同升汞。 4.高錳酸鉀(KMnO4):氧化劑。0.1%濃度能使蛋白質(zhì)與氨基酸氧化,失去酶的活性,用于消毒,能抑制或殺死 雜菌。 5.乙醇(CH3CH3OH):又稱酒精。消毒以75%濃度的效果最好。它能使蛋白質(zhì)脫水變性。高濃度酒精會(huì)使蛋白質(zhì)很快脫水凝固,消毒作用反而減弱。 6.新潔爾滅:0.25%新潔爾滅用于無(wú)菌箱、無(wú)菌室的滅菌。一般新潔爾滅5%原液50毫升;加水950毫升配成。 7.漂白粉水:取漂白粉10克,加水140毫升配成。通常在使用前臨時(shí)配制,靜置1~2小時(shí),取上清液噴射,進(jìn) 行室內(nèi)消毒,每平方米用1升。 8.藥皂:煤酚皂、硼酸皂等各種藥皂的水溶液,均可用于器具、橡皮塞及手指的消毒。 9.2%硫酸銅溶液:用硫酸銅(膽礬)2克,加水至 100毫升加熱溶解配成。用于床架、木架等各種菌種架的消 毒。還可用5%硫酸銅溶液。 10.0.5%波爾多液:先用硫酸銅1斤,溶于100斤水, 再用石灰1斤,加水100斤。然后等量混合起來(lái)即成。用于菌種架、段木的消毒。 11.多菌靈:用于殺滅真菌、半知茵。1:800倍拌料或 1:500倍噴灑均可。 (二)無(wú)菌箱及無(wú)菌室的消毒滅菌 無(wú)菌箱的消毒滅菌,可采取以下幾種方法: l.用甲醛和高錳酸鉀混合熏蒸:一般每平方米需40%甲醛10毫升、高錳酸鉀8毫升,進(jìn)行熏蒸。使用時(shí),先密閉門窗,量甲醛溶液盛入容器中、然后倒入量好的高錳酸鉀,人員隨之離開(kāi)接種室,關(guān)緊房門,熏蒸20—30分鐘即可。 2.0.1%升汞水消毒:用0.1%升汞水浸過(guò)的紗布或海綿進(jìn)行指擦,或用噴霧器噴霧滅菌,使箱內(nèi)的上下左右都沾上升汞水,手也可用升汞水消毒,并把袖子卷起來(lái)。噴霧后 20~30分鐘,箱內(nèi)的雜菌和霧滴一起落到箱底被殺死,內(nèi)部的空氣就變得很清潔。 3.紫外線照射滅菌:在無(wú)菌箱中裝一支200伏、3O瓦的紫外線燈管;每次開(kāi)20~30分鐘,就能達(dá)到空間殺菌的 目的。照射結(jié)束后,罩黑布半小時(shí),以增強(qiáng)殺菌效果。 4.石炭酸噴霧:在每次接種之前,用5%石炭酸溶液噴霧,可促使空氣中的微粒和雜菌沉降,防止桌面微塵飛揚(yáng),并有殺菌作用。 5.石灰揩擦:經(jīng)常用藥物熏蒸,易造成酸性環(huán)境,特別用甲醛和高錳酸鉀熏蒸長(zhǎng)久,污染往往越來(lái)越嚴(yán)重,預(yù)防辦法可把各種藥品交替使用,過(guò)一段時(shí)間(約五周)用石灰擦洗一遍。實(shí)踐證明,這樣做效果很好。 無(wú)菌室消毒同無(wú)菌箱。 (三)無(wú)菌室的使用規(guī)程 無(wú)菌室無(wú)固定程序,但按一般操作應(yīng)遵循如下規(guī)程: 1.接種室內(nèi)和緩沖室內(nèi)使用前,用5%石炭酸溶液噴霧。把所需要的器材搬入緩沖室清洗,等曬干后搬入接種 室,打開(kāi)紫外線燈,照射殺菌。 2.穿上工作服及無(wú)菌工作帽、鞋,然后用煤皂液洗手2 分鐘。進(jìn)人接種室后,查驗(yàn)器械是否放在一定位置。然后用 5%石炭酸溶液重點(diǎn)在工作臺(tái)的上方和附近的地面上噴霧。然后退回緩沖室。還可給接種室門口地面灑一層石灰,進(jìn)門時(shí)踩石灰可使鞋底保持無(wú)雜菌狀態(tài)。 3.接種操作前,用70%的酒精棉球擦手。進(jìn)行無(wú)菌操作時(shí),要嚴(yán)格認(rèn)真,動(dòng)作輕捷,盡量減少空氣流動(dòng)。 4.工作結(jié)束后,立即將臺(tái)面收拾干凈,不留殘物。然后用5%石炭酸全面噴灑。 5.操作時(shí),注意安全。如棉塞著火,用手緊握即可熄滅。如打破菌瓶,可用抹布沾5%石炭酸,收拾到廢物桶 內(nèi)。每次的污染物應(yīng)小心放在盤內(nèi),蓋嚴(yán)拿出室外深埋或燒掉。 (四)無(wú)菌室空氣污染情況的檢驗(yàn) 定期檢驗(yàn)無(wú)菌室空氣污染情況,對(duì)改進(jìn)滅菌措施,提高成品率是非常必要的。常用方法步驟如下: 1.平板檢驗(yàn)法:用常規(guī)培養(yǎng)基,倒成平板,收入接種室。在事先熏蒸好的接種室,使用前半小時(shí)或1小時(shí)把供試的培養(yǎng)皿或試管打開(kāi),按預(yù)定時(shí)間蓋好培養(yǎng)皿或試管。留對(duì)照皿不打開(kāi)。然后一起放入30℃的溫箱中培養(yǎng)48小時(shí),檢查有無(wú)菌殖生長(zhǎng),并由菌落形態(tài),判斷雜菌種類。一般要求平板培養(yǎng)基開(kāi)蓋5分鐘,菌落不超過(guò)3個(gè);敘面培養(yǎng)基開(kāi)塞 30分鐘者,以不出現(xiàn)菌落為合格。 2.斜面檢驗(yàn)法:將常用的瓊脂斜面培養(yǎng)基各取二管, 放入接種室,按無(wú)菌操作各將其中的一管的棉塞取出,放在滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)。經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后,再將棉塞通過(guò)火焰,塞回試管,連同對(duì)照一起培養(yǎng)。經(jīng)48小時(shí)后,檢驗(yàn)有無(wú)雜菌生長(zhǎng)。和上邊方法同。 3.空氣污染情況檢驗(yàn):在接種過(guò)程中,人員的出過(guò)、器材的搬放、接種操作的動(dòng)作等原因造成空氣污染,檢驗(yàn)方法是在準(zhǔn)備工作結(jié)束后,接種操作開(kāi)始時(shí),按上述方法打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋子或試管塞,經(jīng)5分鐘、30分鐘或直到工作結(jié)束時(shí)再蓋好,以檢驗(yàn)在不同的使用時(shí)間內(nèi),空氣污染的程度。 如霉菌較多時(shí);可先用5%石炭酸全面噴射后,再用甲醛熏蒸。如細(xì)菌較多時(shí),可采取用乳酸和甲醛交替熏蒸的辦法加以殺滅。 |
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