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提問時(shí)間 2013-01-28 21:31
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提問時(shí)間 2013-01-28 21:31
北京時(shí)間1月25日凌晨消息，新西蘭牛奶中發(fā)現(xiàn)了有害物質(zhì)——雙氰胺。雙氰胺又名二氰二胺，縮寫DICY或DCD。雖然國際標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)食品中的雙氰胺限量，但高劑量的雙氰胺對(duì)人體是有毒的。
本文采用Cleanert® MAS-QuChERS-雙氰胺凈化管（貨號(hào)：MS-DI5001）和Venusil® HILIC液相色譜柱，建立了奶粉中雙氰胺的MAS-QuEChERS快速前處理方法和LC-UV以及LC-MS/MS檢測方法。
實(shí)驗(yàn)部分
儀器和試劑
高效液相色譜儀，渦旋振蕩器，超聲波清洗機(jī)，氮吹儀。
雙氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，Cleanert® MAS-QuChERS-雙氰胺凈化管，Venusil® HILIC液相色譜柱，微孔濾膜，乙酸銨、乙酸、乙腈為色譜純，實(shí)驗(yàn)用水為超純水。
實(shí)驗(yàn)方法
提取、凈化
稱取1g試樣于50ml具塞離心管中，加入2ml水溶解后，加乙腈定容至10ml，超聲10min，8000r/min離心5min，取2ml上清液加Cleanert® MAS-QuChERS-雙氰胺凈化管中，，渦旋0.5min，8000r/min離心5min，取上清液過0.22um濾膜，待測。
HPLC法：
色譜條件：
色譜柱：Venusil® HILIC 5μm 100Å 4.6*250mm；
流動(dòng)相：A：10mmol/L乙酸銨（pH=4.0）；
B：乙腈；
A：B=10:90；
檢測波長：220nm；
進(jìn)樣量：10µl；
柱溫：30℃；
流速：1ml/min。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
線性關(guān)系和檢出限
準(zhǔn)確稱取雙氰胺標(biāo)準(zhǔn)品50mg于50ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液；
分別量取一定量的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用乙腈稀釋，配置成濃度為0.1µg/ml，0.5µg/ml，1.0µg/ml，2.0µg/ml，5.0µg/ml和10.0µg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述色譜條件，依次進(jìn)樣檢測。以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，擬合線性方程，結(jié)果見表2：
| 名稱 | 保留時(shí)間 | 線性方程 | 相關(guān)系數(shù) | 最低定量限（S/N=10） |
| 雙氰胺 | 4.92min | Y=116.44X+3.2699 | 0.9997 | 0.1µg/ml |
檢測方法穩(wěn)定性考察
選用10.0µg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6針，計(jì)算其保留時(shí)間和峰面積的RSD值，結(jié)果見表3：
| 標(biāo)號(hào) | 保留時(shí)間，min | 峰面積 |
| 1 | 4.930 | 1061.7 |
| 2 | 4.933 | 1072.2 |
| 3 | 4.930 | 1064.4 |
| 4 | 4.929 | 1079.7 |
| 5 | 4.930 | 1067.3 |
| 6 | 4.934 | 1073.6 |
| RSD，% | 0.04 | 0.62 |
準(zhǔn)確度和精密度
選取市售某品牌奶粉試樣，進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表4
| 平行1，% | 平行2，% | 平行3，% | 平均值，% | RSD，% |
| 98.6 | 88.4 | 89.8 | 92.3 | 5.99 |
LC-MS/MS法：
色譜條件：
色譜柱：Venusil® HILIC 5μm 100Å 2.1*150mm；
流動(dòng)相：A：0.5mmol/L乙酸銨（pH=4.0）
B：乙腈
A：B=10:90
進(jìn)樣量：10µl；
柱溫：30℃；
流速：0.2 ml/min。
質(zhì)譜條件
質(zhì)譜儀：API 4000+；
離子源：電噴霧離子源；
掃描方式：正離子掃描；
檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測；
CAD：8.00；
CUR：10.00；
GS1：60.00；
GS2：50.00；
IS：5500.00；
TEM：500.00。
| 藥物名稱 | 監(jiān)測離子對(duì) | DP | EP | CE | CXP |
| 雙氰胺 | 85/68 | 71 | 10 | 41 | 6 |
| 85/43 | 71 | 10 | 41 | 6 |
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
線性關(guān)系和檢出限
準(zhǔn)確稱取雙氰胺標(biāo)準(zhǔn)品50mg于50ml容量瓶中，加水溶液并稀釋至刻度，作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液；
分別量取一定量的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用乙腈稀釋，配置成濃度為5ng/ml，10ng/ml，20ng/ml，50ng/ml，100ng/ml和500ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述液質(zhì)方法，依次進(jìn)樣檢測。以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，擬合線性方程，結(jié)果見下表6：
| 名稱 | 保留時(shí)間 | 線性方程 | 相關(guān)系數(shù) | 最低定量限（S/N=10） |
| 雙氰胺 | 3.15min | Y=8777.2X+7435.9 | 0.9993 | 5ng/ml |
檢測方法穩(wěn)定性考察
選用50.0ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6針，計(jì)算其保留時(shí)間和峰面積的RSD值，結(jié)果見表7：
| 標(biāo)號(hào) | 保留時(shí)間，min | 峰面積 |
| 1 | 3.29 | 382950 |
| 2 | 3.30 | 387950 |
| 3 | 3.25 | 382840 |
| 4 | 3.31 | 399820 |
| 5 | 3.30 | 378580 |
| 6 | 3.30 | 383810 |
| RSD，% | 0.65 | 1.92 |
準(zhǔn)確度和精密度
選取市售某品牌奶粉試樣，進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表8。采用空白樣品稀釋法判斷檢測方法的基質(zhì)效應(yīng)影響�？瞻變艋合♂尯鸵译嫦♂尩臉�(biāo)準(zhǔn)溶液，雙氰胺峰面積和相對(duì)豐度比無明顯變化，故判斷該方法無基質(zhì)效應(yīng)的影響。
| 平行1，% | 平行2，% | 平行3，% | 平均值，% | RSD，% |
| 84.6 | 80.7 | 90.2 | 85.2 | 5.61 |
圖1 定性定量穩(wěn)定性考察譜圖（HPLC法）
圖2 雙氰胺0.5μg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖（HPLC法）
圖3 奶粉空白譜圖（HPLC法）
圖4 奶粉10μg/g空白譜圖（HPLC法）
圖 5 10ng/ml雙氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)譜圖
圖 6 奶粉空白質(zhì)譜圖
剛在網(wǎng)上看見的，不知道靠譜不。
大家都用過哪些方法呢？給個(gè)您親身經(jīng)歷過的真實(shí)案例吧。
年底了，還讓這個(gè)鬧得人心惶惶啊�。�
